Cuantificar cronológico levadura Duración de la vida por consecuencia de células envejecidas

Summary

Envejecimiento cronológico en la levadura se refiere a la pérdida de la viabilidad celular asociado con el tiempo en la fase estacionaria. Aquí se describe un método de alto rendimiento para determinar cuantitativamente la levadura abarcan la vida cronológica.

Abstract

La levadura en ciernes<em> Saccharomyces cerevisiae</em> Ha demostrado ser un importante organismo modelo en el campo de la investigación sobre el envejecimiento¹. La replicación y abarca cronológicamente la vida son dos paradigmas establecidos utilizados para estudiar el envejecimiento en la levadura. Envejecimiento replicativo se define como el número de células hijas una célula de levadura madre soltera produce antes de la senescencia y el envejecimiento cronológico se define por la longitud de las células de tiempo puede sobrevivir en una que no se dividen, la quietud, como el estado². Hemos desarrollado un método de alto rendimiento para la medición cuantitativa de la vida cronológica. Este método consiste en el envejecimiento de las células en un medio definido con agitación ya temperatura constante. En cada edad de punto, una sub-población de las células se retira de la cultura del envejecimiento y se inoculó en medio de cultivo rico. Una curva de alta resolución de crecimiento se obtiene entonces para esta subpoblación de células envejecidas con una máquina Bioscreen C MBR. Un algoritmo se aplica para determinar la proporción relativa de células viables en cada sub-población basado en la cinética de crecimiento en cada etapa de punto. Este método requiere mucho menos tiempo y recursos en comparación con otras pruebas de vida cronológica, mientras que el mantenimiento de la reproducibilidad y precisión. La naturaleza de alto rendimiento de este ensayo debe permitir a gran escala de pantallas de genética y química para identificar nuevos modificadores de la longevidad de realizar más pruebas en organismos más complejos.

Protocol

Parte 1: Preparación de los cultivos de envejecimiento Cepas racha de interés de las existencias congeladas en placas de agar YEPD (1% extracto de levadura, 2% Bacto-peptona, 2% de agar, 2% de glucosa). Se incuban las células a 30 ˚ C durante 48 horas o hasta que las colonias solo aparecen. Elige colonias aisladas e inocular en 5 ml de medio líquido YEPD (1% extracto de levadura, 2% Bacto-peptona, 2% de glucosa) en tubos de ensayo. Crecer cultivos de una noche a 30 ˚ C, man…

Discussion

El alto rendimiento de la vida cronológica ensayo de duración se describe aquí es un método eficaz para cuantificar el potencial de envejecimiento de un gran número de cepas con alta exactitud y precisión. El principal avance de este método sobre los métodos clásicos para determinar la supervivencia de contar unidades formadoras de colonias (véase, por ejemplo ³⁾ es el uso de un dispositivo de lectura agitador / incubadora / placa como la máquina Bioscreen C MBR para obtener alta resolución de las…

Materials

Material Name	Tipo	Company	Catalogue Number	Comment
Bacto Peptone	Reagent	BD	211677
Bacto Yeast Extract	Reagent	BD	288620
Difco Agar	Reagent	BD	214530
Yeast Nitrogen Base w/o A.A. and A.S.	Reagent	MidSci	J630-500G
Amino Acids	Reagent	Sigma
Ammonium Sulfate	Reagent	Spectrum	AM185
Dextrose	Reagent	Fisher	D16-10
Bioscreen C MBR machine	Tool	Growth Curves USA	5101370
Bioscreen 100-well Honeycomb plate	Tool	Growth Curves USA	9502550