Yaşlı Hücre akıbet tarafından Maya Kronolojik Ömrü miktarının
Summary
Maya Kronolojik yaşlanma, sabit faz zaman ile ilişkili hücre canlılığı kaybı anlamına gelmektedir. Burada maya kronolojik ömrü kantitatif olarak belirlenmesi için yüksek verimli bir yöntem açıklanmaktadır.
Abstract
Maya<em> Saccharomyces cerevisiae</em> Yaşlanma araştırma alanında önemli bir model organizma olarak kanıtlanmıştır<sup> 1</sup>. Replikatif ve kronolojik ömürleri maya yaşlanma incelemek için kullanılan iki kurulan paradigmalar. Replikatif yaşlanma tek bir maya anne hücre yaşlanması önce ürettiği kızı hücrelerinin sayısı olarak tanımlanır; kronolojik yaşlanma zaman hücrelerinin uzunluğu ile tanımlanır olmayan bir bölme, sükunet gibi hayatta.<sup> 2</sup>. Biz kronolojik ömrü kantitatif ölçümü için yüksek verimli bir yöntem geliştirdik. Bu yöntem, ajitasyon altında tanımlanan orta ve sabit sıcaklıkta hücrelerin yaşlanma içerir. Her yaş noktada, hücrelerin bir alt nüfusun yaşlanma kültürünün kaldırılır ve zengin besi inoküle. Bioscreen C MBR makine kullanan yaşlı hücreleri bu alt nüfus için yüksek çözünürlüklü bir büyüme eğrisi elde edilir. Canlı hücreler, her yaş noktada büyüme kinetiği dayalı, her bir alt-nüfus oranı belirlemek için bir algoritma uygulanır. Bu yöntem, tekrarlanabilirlik ve hassas korurken diğer kronolojik ömrü testleri karşılaştırıldığında önemli ölçüde daha az zaman ve kaynak gerektirir. Bu testte yüksek verimlilik doğa daha karmaşık organizmalar daha fazla test için yeni uzun ömürlü değiştiriciler tanımlamak için, büyük ölçekli, genetik ve kimyasal ekranlar için izin vermelidir.
Protocol
Discussion
Burada açıklanan yüksek verim kronolojik ömrü tahlil, yaşlanma, yüksek doğruluk ve hassasiyet ile suşlarının çok sayıda potansiyel ölçülmesi için etkili bir yöntemdir. Bu yöntemin birincil önceden koloni oluşturan birim (örneğin 3 görmek) sayarak hayatta kalma belirlenmesi için klasik yöntemleri üzerinde, yüksek çözünürlüklü büyüme eğrileri elde etmek için bu Bioscreen C MBR makine olarak bir çalkalayıcı / inkübatör / plaka okuma cihazı kullanımı Her yaş noktası…
Acknowledgements
Bu çalışma, Ulusal Sağlık Enstitüsü, Hibe 1R21AG031965-01A1 tarafından desteklenen oldu. MK Yaşlanma Ellison Tıp Vakfı Yeni Scholar.
Materials
| Material Name | Tipo | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| Bacto Peptone | Reagent | BD | 211677 | |
| Bacto Yeast Extract | Reagent | BD | 288620 | |
| Difco Agar | Reagent | BD | 214530 | |
| Yeast Nitrogen Base w/o A.A. and A.S. | Reagent | MidSci | J630-500G | |
| Amino Acids | Reagent | Sigma | ||
| Ammonium Sulfate | Reagent | Spectrum | AM185 | |
| Dextrose | Reagent | Fisher | D16-10 | |
| Bioscreen C MBR machine | Tool | Growth Curves USA | 5101370 | |
| Bioscreen 100-well Honeycomb plate | Tool | Growth Curves USA | 9502550 |
Riferimenti
- Steinkraus, K. A., Kaeberlein, M., Kennedy, B. K. Replicative aging in yeast: the means to the end. Annu Rev Cell Dev Biol. 24, 29 (2008).
- Kaeberlein, M., Conn, P. M. . Handbook of models for human aging. , 109 (2006).
- Fabrizio, P., Longo, V. D. The chronological life span of Saccharomyces cerevisiae. Aging Cell. 2 (2), 73 (2003).
- Murakami, C. J., Burtner, C. R., Kennedy, B. K., Kaeberlein, M. A method for high-throughput quantitative analysis of yeast chronological life span. J Gerontol A Biol Sci Med Sci. 63 (2), 113 (2008).
- Piper, P. W., Harris, N. L., MacLean, M. Preadaptation to efficient respiratory maintenance is essential both for maximal longevity and the retention of replicative potential in chronologically ageing yeast. Mech Ageing Dev. 127 (9), 733 (2006).
- Fabrizio, P., et al. Superoxide is a mediator of an altruistic aging program in Saccharomyces cerevisiae. J Cell Biol. 166 (7), 1055 (2004).
