माउस oocytes में न्यूक्लियर ट्रांसफर
Summary
इस फिल्म और प्रोटोकॉल के परमाणु हस्तांतरण के सीखने में मदद करने का इरादा कर रहे हैं.
Abstract
एक unfertilized oocyte में परमाणु हस्तांतरण एक विभेदित सेल के विकास क्षमता को पुनर्स्थापित कर सकते हैं. यह दर्शाता है कि विकास, भेदभाव, और उम्र बढ़ने अंतर्निहित प्रक्रियाओं आनुवंशिक प्रक्रियाओं के बजाय epigenetic हैं. उलटने इन प्रक्रियाओं के बुनियादी अनुसंधान में रोमांचक दृष्टिकोण को खोलता है, और अधिक दूर के भविष्य में पुनर्योजी चिकित्सा में. माउस में, भ्रूण स्टेम कोशिकाओं के क्लोन preimplantation चरण भ्रूण से प्राप्त किया जा सकता है. इस तरह के भ्रूण स्टेम कोशिकाओं वयस्क जीव के सभी प्रकार की कोशिकाओं को जन्म देने की क्षमता है. महत्वपूर्ण बात, इन कोशिकाओं के आनुवंशिक दाता के लिए समान हैं. मानव को यदि लागू हो, यह एक मरीज से स्टेम कोशिकाओं की व्युत्पत्ति की अनुमति होगी. फिर इन कोशिकाओं को मरीज के प्रभावित कोशिका प्रकार में विभेदित किया जा सकता है और इन विट्रो में अध्ययन किया है, या क्षतिग्रस्त या लापता कोशिकाओं की जगह इस्तेमाल किया. माउस में परमाणु हस्तांतरण के अध्ययन के लिए महत्वपूर्ण बनी हुई है के रूप में यह हमारे परमाणु reprogramming की सिद्धांतों के बारे में सूचित कर सकते हैं. यह फिल्म और साथ प्रोटोकॉल माउस में परमाणु हस्तांतरण सीखने में मदद करने का इरादा कर रहे हैं, एक विधि शुरू प्रो Yanagimachi (1998 वाकायामा एट अल.) के समूह में विकसित.
Protocol
Discussion
गुड लक!
Divulgazioni
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
डे प्रोटोकॉल के महत्वपूर्ण पढ़ने के लिए अपने NT चालें और डॉ. स्टीफन सुलिवान और गैरेट Birkhoff साझा करने के लिए डॉ. छिपाएँ Akutsu धन्यवाद देना चाहूंगा.
Materials
| Material Name | Tipo | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| Cytochalastin B | Sigma | 100x stock = 500 ug/mL Cytochalasin B in DMSO. Store at -20˚ C. | ||
| Strontium Chloride | 10x stock = 100 mM SrCl2 in H2O. Store at room temperature. | |||
| MCZB Stock Salts | Filter sterilize 500 mL master salts (good for 3-4 months; store at 4˚ C) | |||
| HCZB Stock Salts | Start with 500 mL master salts. Add 50 mg PVA. Stir for 30-60 min and sterile filter (good for 3 months; store at 4˚ C). | |||
| PVA | Sigma | P-8136 | cold-soluble | |
| HCZB with 11% w/v PVP | Start with 20 ml HCZB medium in a 50 mL conical tube. Place 22g PVP on top of liquid. Close tube and store undisturbed at 4˚ C for 72 – 96 hrs, at which time the PVP will have entered solution. Filter sterilize through an 8 mm filter and store at 4˚ C. | |||
| PVP | ICN Biochemicals | MW 360000 |
Riferimenti
- Eggan, K., Jaenisch, R., Pease, S., Lois, C. . Mammalian and Avian Transgenesis- New Approaches. , (2006).
- Nagy, A., Gertsenstein, M., Vintersten, K., Behringer, R., Press, C. S. H. L. . Manipulating the mouse embryo. , (2003).
- Wakayama, T., Perry, A. C., Zuccotti, M., Johnson, K. R., Yanagimachi, R. Full-term development of mice from enucleated oocytes injected with cumulus cell nuclei. Nature. 394, 369-374 (1998).
