Summary
Ten film i protokół mają pomóc nauki transfer jądra.
Abstract
Transfer jądra do zapłodnione komórki jajowej może przywrócić potencjału rozwojowego do zróżnicowanych komórek. To pokazuje, że procesy leżące u podstaw rozwoju, różnicowania i starzenie się są epigenetyczne, a nie genetyczne procesy. Odwracalności tych procesów otwiera ekscytujące perspektyw w zakresie badań podstawowych, a w bardziej odległej przyszłości, w medycynie regeneracyjnej. U myszy, embrionalnych komórek macierzystych mogą być uzyskane ze sklonowanych zarodków etapie preimplantacyjnej. Takie embrionalne komórki macierzyste mają zdolność do prowadzić do wszystkich typów komórek dorosłego organizmu. Co ważne, te komórki są genetycznie identyczne z dawcą. Jeśli zastosowanie do człowieka, pozwoli na wyprowadzenie komórek macierzystych od pacjenta. Komórki te mogą następnie być zróżnicowane w których to dotyczy typ komórek pacjenta oraz badania in vitro, lub stosowane w celu zastąpienia uszkodzonych lub brakujących ogniw. Badanie transfer jądra u myszy pozostaje istotne, ponieważ mogą nas informować o zasadach jądrowej przeprogramowania. Ten film i towarzyszący mu protokół mają pomóc nauki transfer jądra u myszy, metoda opracowana początkowo w grupie prof Yanagimachi (Wakayama et al. 1998).
Protocol
Discussion
Powodzenia!
Divulgazioni
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
DE pragnie podziękować dr Ukryj Akutsu za podzielenie się swoją NT sztuczki i dr Stephen Sullivan i Garrett Birkhoff do krytycznej lektury protokołu.
Materials
| Material Name | Tipo | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| Cytochalastin B | Sigma | 100x stock = 500 ug/mL Cytochalasin B in DMSO. Store at -20˚ C. | ||
| Strontium Chloride | 10x stock = 100 mM SrCl2 in H2O. Store at room temperature. | |||
| MCZB Stock Salts | Filter sterilize 500 mL master salts (good for 3-4 months; store at 4˚ C) | |||
| HCZB Stock Salts | Start with 500 mL master salts. Add 50 mg PVA. Stir for 30-60 min and sterile filter (good for 3 months; store at 4˚ C). | |||
| PVA | Sigma | P-8136 | cold-soluble | |
| HCZB with 11% w/v PVP | Start with 20 ml HCZB medium in a 50 mL conical tube. Place 22g PVP on top of liquid. Close tube and store undisturbed at 4˚ C for 72 – 96 hrs, at which time the PVP will have entered solution. Filter sterilize through an 8 mm filter and store at 4˚ C. | |||
| PVP | ICN Biochemicals | MW 360000 |
Riferimenti
- Eggan, K., Jaenisch, R., Pease, S., Lois, C. . Mammalian and Avian Transgenesis- New Approaches. , (2006).
- Nagy, A., Gertsenstein, M., Vintersten, K., Behringer, R., Press, C. S. H. L. . Manipulating the mouse embryo. , (2003).
- Wakayama, T., Perry, A. C., Zuccotti, M., Johnson, K. R., Yanagimachi, R. Full-term development of mice from enucleated oocytes injected with cumulus cell nuclei. Nature. 394, 369-374 (1998).
