Kärnöverföring till Mouse oocyter
Summary
Denna film och protokollet är avsedda att hjälpa lära kärnöverföring.
Abstract
Kärnöverföring till en obefruktade ägget kan återställa utvecklingspotential i en differentierad cell. Detta visar att de processer som ligger bakom utvecklingen, differentiering och åldrande är epigenetisk snarare än genetisk processer. Reversibiliteten av dessa processer öppnar spännande perspektiv inom grundforskning och på mer avlägsna framtiden, regenerativ medicin. I musen kan embryonala stamceller hämtas från klonade embryon preimplantatorisk skede. Sådana embryonala stamceller har förmågan att ge upphov till alla celltyper i den vuxna organismen. Viktigare är att dessa celler är genetiskt identiska till donatorn. Om tillämpligt för människors, skulle detta göra det möjligt härledning av stamceller från en patient. Dessa celler kan sedan delas in i de drabbade celltyp av patienten och studerade in vitro, eller användas för att ersätta skadade eller saknade celler. Studien av kärnöverföring i musen är viktig eftersom den kan upplysa oss om principerna för kärnkraft omprogrammering. Den här filmen och den åtföljande protokollet är avsedda att hjälpa lärandet kärnöverföring hos mus, en metod som först utvecklades i den grupp av professor Yanagimachi (WAKAYAMA et al. 1998).
Protocol
Discussion
Lycka till!
Divulgazioni
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
DE vill tacka Dr Göm Akutsu för att dela hans NT tricks och Dr Stephen Sullivan och Garrett Birkhoff för kritisk läsning av protokollet.
Materials
| Material Name | Tipo | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| Cytochalastin B | Sigma | 100x stock = 500 ug/mL Cytochalasin B in DMSO. Store at -20˚ C. | ||
| Strontium Chloride | 10x stock = 100 mM SrCl2 in H2O. Store at room temperature. | |||
| MCZB Stock Salts | Filter sterilize 500 mL master salts (good for 3-4 months; store at 4˚ C) | |||
| HCZB Stock Salts | Start with 500 mL master salts. Add 50 mg PVA. Stir for 30-60 min and sterile filter (good for 3 months; store at 4˚ C). | |||
| PVA | Sigma | P-8136 | cold-soluble | |
| HCZB with 11% w/v PVP | Start with 20 ml HCZB medium in a 50 mL conical tube. Place 22g PVP on top of liquid. Close tube and store undisturbed at 4˚ C for 72 – 96 hrs, at which time the PVP will have entered solution. Filter sterilize through an 8 mm filter and store at 4˚ C. | |||
| PVP | ICN Biochemicals | MW 360000 |
Riferimenti
- Eggan, K., Jaenisch, R., Pease, S., Lois, C. . Mammalian and Avian Transgenesis- New Approaches. , (2006).
- Nagy, A., Gertsenstein, M., Vintersten, K., Behringer, R., Press, C. S. H. L. . Manipulating the mouse embryo. , (2003).
- Wakayama, T., Perry, A. C., Zuccotti, M., Johnson, K. R., Yanagimachi, R. Full-term development of mice from enucleated oocytes injected with cumulus cell nuclei. Nature. 394, 369-374 (1998).
