Questo film e il protocollo hanno lo scopo di aiutare l'apprendimento di trasferimento nucleare.
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Articolo metodologico
Trasferimento nucleare in oociti mouse
In questo articolo
Sommario
Abstract
Trasferimento nucleare in un ovocita non fecondato in grado di ripristinare il potenziale di sviluppo di una cellula differenziata. Questo dimostra che i processi alla base dello sviluppo, la differenziazione e l'invecchiamento sono epigenetiche, piuttosto che processi genetici. La reversibilità di questi processi si apre interessanti prospettive nella ricerca di base, e in un futuro più lontano, nella medicina rigenerativa. Nel topo, le cellule staminali embrionali possono essere derivate da embrioni clonati fase preimpianto. Tali cellule staminali embrionali hanno la capacità di dare origine a tutti i tipi di cellule dell'organismo adulto. È importante sottolineare che queste cellule sono geneticamente identiche al donatore. Se applicabile a uomo, ciò permetterebbe la derivazione di cellule staminali da un paziente. Queste cellule potrebbero poi essere differenziate nel tipo di cellula colpita del paziente e studiate in vitro, o utilizzati per sostituire le cellule danneggiate o mancanti. Lo studio del trasferimento nucleare nel topo rimane importante perché ci può diffondere i principi della riprogrammazione nucleare. Questo film e il protocollo di accompagnamento hanno lo scopo di aiutare l'apprendimento trasferimento nucleare nel topo, un metodo sviluppato inizialmente nel gruppo del Prof. Yanagimachi (WAKAYAMA et al. 1998).
Protocollo
Preparazioni:
- Una descrizione dettagliata di superovulazione e di coltura degli embrioni MicroDrop può essere trovato altrove 2.
- Preparare una capsula di Petri con microgocce di medio dell'embrione cultura (ad esempio KSOM, Chemicon). Coprite con olio minerale (olio minerale lotti dovrebbero essere testati per la compatibilità con la cultura degli embrioni). Equilibrare a 37 ° C in aria più il 5% di CO 2. (In Thermo-Electron acqua incubatore 3110 camicia o equivalente)
- Preparare un piatto per l'isolamento degli ovociti: gocce Luogo di Hepes tamponata CZB....
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Discussione
Buona fortuna!
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Dichiarazioni
Gli autori non hanno nulla da dichiarare.
Ringraziamenti
DE desidera ringraziare il Dott. Hide Akutsu per la condivisione dei suoi trucchi NT e il Dr. Stephen Sullivan e Garrett Birkhoff per la lettura critica del protocollo.
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Materiali
Si prega di verificare la presenza di ulteriori composizioni buffer nella parte protocollo.
Riferimenti
- Eggan, K., Jaenisch, R. Mammalian and Avian Transgenesis- New Approaches. Pease, S., Lois, C. , Springer. (2006).
- Nagy, A., Gertsenstein, M., Vintersten, K., Behringer, R. Manipulating the mouse embryo. Press, C. S. H. L. , (2003).
- Wakayama, T., Perry, A. C., Zuccotti, M., Johnson, K. R., Yanagimachi, R.
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Ristampe e permessi
