Descrevemos a dissecção fina do sistema nervoso stomatogastric do estômago da lagosta americana (<i> Homarus americanus</i>).
Com o objetivo de entender como os sistemas nervosos produzem atividade e respondem ao ambiente, os neurocientistas vez para modelar sistemas que exibem a atividade de interesse e são acessíveis e passíveis de métodos experimentais. O sistema nervoso stomatogastric (STNS) da lagosta americana (<i> Homarus americanus</i>; Também sabem foi a lagosta Atlântico ou Maine) foi estabelecida como um sistema modelo para estudar o ritmo de geração de redes e neuromodulação das redes. O STNS consiste de 3 gânglios anterior (2 gânglios comissural e um gânglio esofágico), contendo neurônios moduladores que o projeto central para o gânglio stomatogastric (STG). O STG contém aproximadamente 30 neurônios que compõem o padrão de duas redes de centrais de geração, as redes pilórica e gástricas que estão subjacentes comportamentos alimentares em crustáceos<sup> 1,2</sup>. Embora seja possível estudar este sistema<i> In vivo</i<sup> 3</sup>, O STNS continua a produzir a sua atividade rítmica quando isolados<i> In vitro</i>. Isolamento físico dos STNS em um prato permite fácil acesso ao somata nos gânglios para intracelular gravações eletrofisiológicas e para os nervos do STNS para gravações extracelular. Isolar o STNS é um processo em duas partes. A primeira parte, dissecando o estômago do animal, é descrito em um artigo de vídeo que acompanha<sup> 4</sup>. Neste artigo de vídeo, técnicas de dissecção fina são usadas para isolar o STNS do estômago. Este procedimento resulta em uma preparação do sistema nervoso que está disponível para as gravações eletrofisiológicas.
A anatomia do estômago lagosta e STNS tem sido bem descrita anteriormente 5,6, e as variações deste procedimento dissecção têm sido utilizados em numerosos estudos. Recomendamos familiarizar-se com a anatomia do estômago 5-7 e STNS 5,8 antes dissecções início. Essa familiaridade vai diminuir o risco de danos acidentais aos nervos e tecidos.
Para manter a saúde da preparação, é fundamental para manter a preparação em uma temperatura baixa. Isso é facilmente alcançado através da troca de solução salina a cada 30 minutos com 4 ˚ C salina mantidos em uma geladeira. Quando imersos em solução salina fria, a preparação STNS isolada é viável para muitas horas. Gravações em gammarus relacionadas Homarus demonstraram atividade rítmica estável a partir do STG todo cinco dias in vitro 9; robustez semelhante foi visto em H. americanus (pers. obs.).
Entrada modulatórios para o STG dos gânglios comissural é necessário para preservar os padrões motores em curso. Portanto, para manter uma atividade normal rítmica estes gânglios e do íon, filho, e os nervos stn deve ser mantida intacta. A dissecção descrevemos preserva vários nervos motores (que contém os axônios do neurônio motor): a s AGN (contendo moinho gástrico (GM) axônios), o mvn s (contendo Lateral gástrica (LG) e Inferior Cardíaca (IC) axônios), a s pyn (contendo Pilórica neurônio (PY) axônios), a s pdn (contendo Dilatador Pilórica (PD) axônios), e os s lvn (contendo Pilórica Lateral (LP), Gastric Medial (MG), os axônios de GLP, bem como os da GM, PD e PY). Dissecando adicionais (ou diferentes) os nervos, outras os axônios do neurônio motor pode ser registrado. Cada tipo individual de axônio do neurônio motor pode ser registrado individualmente por dissecação e gravação do nervo que inervam o músculo para que este tipo de projectos neurônio.
Esta preparação pode ser usado para uma variedade de estudos focados em função do sistema nervoso. A atividade dos neurônios pode ser registada utilizando intracelular, gravações eletrodo afiada de somata ou axônios, ou por registro de impulsos elétricos dos nervos extracelularmente. Muitos canais iônicos dos neurônios STG ter sido parcialmente clonado e mRNA pode ser medido a partir somata manualmente puxado 10,11.
Gostaríamos de agradecer nosso consultor, Dr. Eve Marder. Esta pesquisa foi apoiada pelo Instituto Nacional de Saúde concede NS17813 a Eva Marder e NS059255 para AE T.
Material Name | Tipo | Company | Catalogue Number | Comment |
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Fine Tungsten Wire (0.001 in. diameter) | Tool | California Fine Wire | Cut into 1-2mm pieces to use as fine pins. | |
Forceps #5 | Tool | FST | 91150-20 | |
Minuten Pins | Tool | FST | 26002-10 | |
Moria Spring Scissors (7mm blades) | Tool | FST | 15370-52 | These are the top of the line. There are more economical spring scissors available from the same company. |
Petri Dish (100x15mm) | Tool | Fischer | 08-757-12 | Fill 2-4mm with Sylgard 182. |
Sylgard 182 | Altro | Dow Corning | 182 | |
Pin Holder | Tool | FST | 26018-17 | Optional. Desheathing can be done with scissors and fine forceps alone. |
Super fine forceps #5SF | Tool | FST | 11252-00 | |
Tungsten Needles | Tool | FST | 10130-05 | Optional. Desheathing can be done with scissors or with pins cut from fine tungsten wire. |
Dissection microscope |