Tüm Maymun Beyin Büyük Ölçekli Protein Algılama için Toplu immün
Summary
Tüm primat beyin genelinde hedef proteinlere büyük ölçekli İmmuno gömerek yeni doku istihdam ve belirli bir zamanda birden fazla serbest bölümleri toplu boyama için yaratıcı cihazların kullanımı ile kombine yöntemler kesit mümkündür.
Abstract
Immünhistokimyasal (İHK) hedef proteinlerin tespiti için en yaygın kullanılan laboratuvar teknikleri biridir<em> In situ</em>. Tüm beyin çapında bir hedef protein ifade deseni ile ilgili sorular, kemirgen gibi küçük beyinleri, İHK kullanırken cevap nispeten kolay. Ancak, primatlar gibi büyük ve karışık beyinleri, aynı soruları yanıtlarken, zorluklarla dolu bir dizi. Burada bir yetişkin maymun beyni hedef proteinlerin İmmuno için sistematik bir yaklaşım sunuyoruz. Bu yaklaşım, doku gömme ve kesit Neuroscience Associates metodolojisi (NSA) yanı sıra serbest bölümleri toplu boyama için özel olarak geliştirilen araçlar dayanmaktadır. Belirli bir aralıkta, tüm beyni temsil eder, bir dizi bölümleri düzgün boyama ile sonuçlanır. Sonucu lekeli bölümleri protein düzeyleri, belirli bir protein ifade nöronların nüfus ölçmek için analitik yöntemler çok çeşitli tabi tutulabilir.
Protocol
Discussion
Mümkün bütün bir maymun beyin proteinlerin büyük ölçekli algılama yapan bu yordamı iki kritik adımlar vardır. Bir NSA özel bilgi kalır gömme ve kesit protokolü. Diğer HistoTools tarafından sağlanan boyama yemekleri ve sepetler. Ikincisi, belirli bir zamanda çok sayıda (~ 40) bölümleri kolay ve hızlı kullanım sağlar. Aynı zamanda beyin genelinde tüm bölümleri düzgün tedavi için gerekli olan araçları sağlar ve bilimsel bir ses histolojik tedavi için yapar. Buna ek olarak, gömülü ye…
Divulgazioni
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Frank Ervin, Roberta Palmour ve primat çalışmaları devam eden desteği, Batı Hint Adaları, St Kitts bulunan Davranış Bilimleri Vakfı Laboratuar personeline teşekkür ediyoruz. Kanada Sağlık Araştırmaları (AC) ve Ulusal Mühendislik ve Kanada Araştırma Konseyi (MP) Enstitüleri işletme hibeleri – Bu çalışma Frajil X Araştırma SZ Kanada Vakfı (FXRFC) ve bir burs ile desteklenmiştir.
Materials
| Material Name | Tipo | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| anti-FMRP monoclonal antibody | Chemicon | MAB2160 | Requires antigen retrieval in fixed tissue. | |
| anti-NeuN monoclonal antibody | Chemicon | MAB377 | N/A | |
| anti-Neurofilament H monoclonal antibody | Sternberger Monoclonals Inc. | SMI32 | N/A | |
| Antigen Unmasking Solution | Vector Laboratories | H-3300 | N/A | |
| Normal horse serum | Invitrogen | 16050122 | 500 mL | |
| Biotinylated Anti-Mouse IgG (H+L), made in horse | Vector Laboratories | BA-2000 | ||
| VECTASTAIN ABC Kit (Standard) | Vector Laboratories | PK-4000 | 1.5 mg | |
| Staining dish for floating sections | HistoTools | 10009 | 12 x 65 mm | |
| Staining transport basket | HistoTools | 10012 | large (fits 12 x 65 mm dish) |
|
| Triton X-100 | Fisher Scientific | P8514B | N/A | |
| DAB | Fisher Scientific | AC11209-0050 | N/A |
Riferimenti
- Olfert, E. D., Cross, B. M., McWilliam, A. A. . Guide to the Care and Use of Experimental Animals. , (1993).
- Devys, D., Lutz, Y., Rouyer, N., Bellocq, J. P., Mandel, J. L. The FMR-1 protein is cytoplasmic, most abundant in neurons and appears normal in carriers of a fragile X premutation. Nat Genet. 4, 335-340 (1993).
- Mullen, R. J., Buck, C. R., Smith, A. M. NeuN, a neuronal specific nuclear protein in vertebrates. Development. 116, 201-211 (1992).
- Sternberger, L. A., Sternberger, N. H. Monoclonal antibodies distinguish phosphorylated and nonphosphorylated forms of neurofilaments in situ. Proc Natl Acad Sci U S A. 80, 6126-6130 (1983).
