اكتشاف بروتين Ubiquitination
Summary
Ubiquitination هو تعديل مفتاح posttranslational التي قامت بها مجموعة من ثلاثة الانزيمات. ترتبط طفرات في الجينات المسؤولة عن هذا التعديل مع العديد من الأمراض البشرية المختلفة. هنا ، نحن تصف بروتوكولات للكشف عن البروتين في الخلايا ubiquitination مثقف<em> في الجسم الحي</em> وبالأنابيب<em> في المختبر</em>.
Abstract
Ubiquitination ، المرفق التساهمية من اليوبيكويتين ببتيد لاستهداف البروتينات ، هو تعديل مفتاح posttranslational التي قامت بها مجموعة من ثلاثة الانزيمات. وهي تشمل اليوبيكويتين – E1 تفعيل أنزيم اليوبيكويتين – E2 التصريف الانزيم ، واليوبيكويتين E3 يغاز. خلافا لE1 و E2 ، E3 عرض ligases اليوبيكويتين خصوصية الركيزة. من ناحية أخرى ، فإن العديد من الانزيمات deubiquitylating أدوارا في تجهيز البروتينات polyubiquitinated. يمكن أن يؤدي إلى تغيير Ubiquitination الاستقرار البروتين ، وتوطين الخلوية ، والنشاط البيولوجي. ترتبط طفرات في الجينات المسؤولة عن المسار ubiquitination / deubiquitination أو اختلال وظيفة نظام اليوبيكويتين مع العديد من الأمراض البشرية المختلفة مثل أنواع مختلفة من السرطان ، وتنكس عصبي ، والاضطرابات الأيضية. قد كشف ubiquitination تغيير أو العادي للبروتينات هدف توفير فهم أفضل عن التسبب في هذه الأمراض. هنا ، نحن تصف بروتوكولات للكشف عن البروتين في الخلايا ubiquitination مثقف<em> في الجسم الحي</em> وبالأنابيب<em> في المختبر</em>. هذه البروتوكولات هي مفيدة أيضا للكشف عن الأخرى مثل تعديل اليوبيكويتين جزيء صغير مثل sumolyation وneddylation.
Protocol
Discussion
في هذا العرض ، ونحن أول من وصف الخطوات التي تسمح الكشف عن تعديل اليوبيكويتين على بروتين من الاهتمام في خلايا الثدييات مثقف. استخدمنا من أجل الكشف عن ubiquitination تحديدا على البروتين من الفائدة ، وليس على البروتينات المتفاعلة غير تساهمي ، وهو شرط صارم لتحلل الخلية ، وغسل <su…
Divulgazioni
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
وأيد هذا العمل من قبل المعاهد الوطنية للصحة منح RO1 DC006497 ، RO1 NS057289 وPO1 ES016738 (الألف إلى الياء تشانغ) ؛ معهد كاليفورنيا للحصول على منح الطب التجديدي RS1 – 00331-1 وRL1 – 00682 – 1 (الألف إلى الياء تشانغ) ، وباركنسون الأمريكية رابطة مرض (الألف إلى الياء تشو تشانغ وYS) ، وجيه مايكل فوكس مؤسسة للأبحاث مرض باركنسون (Z. تشانغ).
Riferimenti
- Xiong, H. PINK1, and DJ-1 form a ubiquitin E3 ligase complex promoting unfolded protein degradation. J Clin Invest. 119, 650-660 (2009).
- Xirodimas, D. P., Saville, M. K., Bourdon, J. C., Hay, R. T., Lane, D. P. Mdm2-mediated NEDD8 conjugation of p53 inhibits its transcriptional activity. Cell. 118, 83-97 (2004).
- Didier, C. RNF5, a RING finger protein that regulates cell motility by targeting paxillin ubiquitination and altered localization. Mol Cell Biol. 23, 5331-5345 (2003).
- Laney, J. D., Hochsetrasser, M. Unit 14.5 Analysis of Protein Ubiquitination. Current Protocols in Protein Science. , 14.5.1-14.5.11 (2002).
