Beredning av Aggregate råtthjärna kulturer för Neuron och Glia utvecklingsstudier
Summary
Ett protokoll för en embryonal råtthjärna samlade kultur-systemet beskrivs. Multipotenta stamceller i aggregaten kan utveckla och differentiera till neuron, astrocyter och oligodendrocyter.
Abstract
En in vitro-system som rekapitulerar utveckling och differentiering av stamceller till mogna nervceller och Glia i det centrala nervsystemet (CNS) skulle ge en kraftfull plattform för neuroforskare att undersöka AXO-gliaceller interaktion, egenskaper och differentiering av multipotenta progenitorceller, och progression av oligodendroglial härstamning cellerna på cellulär och molekylär nivå. Vi beskriver här ett CNS-system samlade kulturen från embryonala råtta forebrains, som kan hållas i en serumfritt medelstora upp till 3-4 veckor och används i vårt laboratorium som modell för att studera neuron-Glia interaktion och CNS myelination. Detta videoklipp kommer att visa hur man isolera och odla dessa CNS sammanlagda kulturer från E16 råtta hjärnan. Vidare från samma hjärnan dissektion kan höganrikat regelbundna dissocierade neuronala kulturer vara lätt erhållas och användas för olika undersökningar om CNS-nervceller eller används för samarbete kulturer med andra celler.
Protocol
Discussion
Tidiga studier rapporterade bildning av synapser och mogna myelin i rotation-medierad fritt flytande aggregat kulturer 1. CNS samlade kulturen som beskrivs här kombinerar serumfritt tillväxt av multipotenta stamceller i tredimensionell aggregat med bekvämligheten av traditionella 2D-kulturer för att underlätta analyser av cellens utveckling, migration och differentiering in vitro. Systemet kan anpassas och användas för neurala föregångare cell forskning och för utredning av neuron-Glia inte…
Acknowledgements
Denna studie har finansierats delvis av nystartade fonder från Texas A & M University
Riferimenti
- Matthieu, J. M. Myelination in rat brain aggregating cell cultures. Neuroscienze. 3, 565-56 (1978).
- Chen, Y. i. n. g. Isolation and culture of rat and mouse oligodendrocyte precursor cells. Nat. Protocols. 2, 1044-10 (2007).
- Watkins, T. A., Emery, B., Mulinyawe, S., Barres, B. A. Distinct stages of myelination regulated by gamma-secretase and astrocytes in a rapidly myelinating CNS coculture system. Neuron. 60, 555-55 (2008).
- Svenningsen, A. F., Shan, W. e. i. -. S. o. n. g., Colman, D. a. v. i. d. R., Pedraza, L. i. l. i. a. n. a. Rapid method for culturing embryonic neuron-glial cell cocultures. Journal of Neuroscience Research. 72, 565-56 (2003).
