本稿では、成体ラットの心筋細胞を分離、培養に一般的な方法を説明した。コラゲナーゼとプロテアーゼは、単一の心筋細胞を消化して単離するために使用されています。心筋細胞は、ほとんどの実験の要件を満たすこのプロトコルに従って培養した。
培養一次成人の齧歯類の心臓の細胞は、心臓血管研究のための重要なモデル系である。それにもかかわらず、堅牢な、実行可能な培養成人心筋細胞の確立は、多くの研究者のための技術的に困難な、律速段階であることができる。ここでは、数日間培養中で実行可能なまま成体ラットの心筋細胞の高い収量を得るためのプロトコルを説明した。心臓は、低Caで単離され、コラゲナーゼやプロテアーゼで灌流され<sup> 2 +</sup>条件は、単一の筋細胞を回復する。のCa<sup> 2 +</sup>耐性細胞は、細胞外Caで段階的に増加することによって得られる<sup> 2 +</sup以降3回の洗浄ステップで>集中。細胞を濾過し、培養培地中に再懸濁し、ラミニンコートしたガラス上でメッキされています。このプロトコルを使用して得られた培養心筋細胞では最長4日間生存可能と電気生理学、生化学、イメージングと分子生物学を含むほとんどの実験に適しています。
重要なステップは、単離心臓を灌流システム上でハングアップされる速度です。酵素消化の期間の長さは、各ラットのために少し異なる場合があります。調整は、心臓、消化の定期的な期間の後になるとどのようにソフトに依存します。酵素消化後のCa 2徐々に回復+は、Ca 2 +トレラント健康な細胞を得るために不可欠です。
モルモットの場合、プロトコ?…