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Biologia

에 Electrophysiological 녹음 Drosophila 엠브료

Published: May 21, 2009
doi:
10.3791/1348
, ,
1Department of Biological Sciences,University of Illinois, 2Department of Biological Sciences,Vanderbilt University

Summary

Electrophysiological 녹음에서<em> Drosophila</em> 배아 개발 근육과 신경 세포 전기적 특성뿐만 아니라 glutamatergic 신경근육학 접합 및 중앙 cholinergic 및 GABAergic 시냅스의 기능 synaptogenesis의 특성의 분석을 수 있습니다.

Abstract

Drosophila는 배아 발달과 기능 모두의 신경 과학 연구를위한 최고의 유전자 모델입니다. 전통적으로,이 필드는 주로 독립적인 역사 및 과학 사회와 서로 꽤을 분리하고 있습니다. 그러나 이러한 일반적으로 서로 다른 분야 사이의 인터페이스는 기능 전기적 신호 특성과 신경 회로 형성의 마지막 단계에서 기능성 화학 시냅스의 분화 취득을 기본 발달 프로그램입니다. 이 인터페이스는 조사를위한 중요한 지역입니다. Drosophila에서 기능의 개발이 단계는 embryogenesis의 마지막 세번째 동안 <8시간 기간 (25 ° C에서)하는 동안 발생합니다. 이렇게 늦게 발달 기간 동안 힘든, 스며들지 표피 표피의 증착에 수사 때문에하는 어려운 여겨졌다. 획기적인 사전은 로컬 말기 태아의 제어 절개를 사용하는 표피에 적용할 수있는 물 polymerizing 수술 접착제의 적용되었다. 지느러미 세로 절개로 배아가 실험 조사하기 위해 복부 신경 코드 및 신체 벽면 근육을 노출, 평면 마련하실 수 있습니다. 전체 세포 패치 – 클램프 기법은 다음 개별적으로 – 식별 뉴런과 체세포 근육에서 기록을 채용하실 수 있습니다. 이러한 녹음 구성 이온 전류와 뉴런과 근육 모두에서 행동 가능성이 전파의 모양과 성숙을 추적하는 데 사용되었습니다. 이러한 전기적 특성에 영향을 미치는 유전자 돌연변이 이온 채널과 관련된 신호 단지의 분자 조성을 공개하고, 기능 분화의 분자 메커니즘의 탐사를 시작 특징되었습니다. 특히 초점은 중추 신경계와 주변 모두에 시냅스 연결의 조립을했습니다. glutamatergic 신경근육학 교차점 (NMJ)는 광학 이미징 및 electrophysiological 녹음의 조합에 가장 액세스할 수 있습니다. 유리 흡입 전극은 전압 – 고정되어 근육에서 만들어진 흥분성의 접합 전류 (EJC) 기록과, 말초 신경을 자극하는 데 사용됩니다. 이 녹음 구성 버렸네의 기능 분화를 차트와 presynaptic 글루 탐 산염 방출 특성의 모양과 성숙을 추적하는 데 사용되었습니다. 또한, postsynaptic 속성은 글루 탐 산염 수용체 필드의 모양과 성숙을 측정하기 위해 근육의 표면에 직접 글루 탐 산염의 iontophoretic 또는 압력 응용 프로그램을 통해 독립적으로 assayed 수 있습니다. 따라서, 모두 사전과 postsynaptic 요소는 배아 synaptogenesis 동안 별도로 또는 함께 모니터링할 수 있습니다. 이 제도는 크게 배아 버렸네 형성에 악영향을하고, 따라서 버렸네 연결과 기능 시냅스 신호 속성의 사양과 차별을 규제하는 분자 메커니즘을 밝혀 유전자 돌연변이를 분리하고 특성화하는 데 사용되었습니다.

Protocol

1 부 : 장비 및 소모품 Drosophila의 배아에서 Electrophysiological 녹음 먼저 다른 조브 동영상에서 설명하는 배아 절개 기법에 능력을 필요로합니다. Drosophila의 배아에서 Electrophysiological 녹화는 표준 패치 클램프 녹음 구성을 활용합니다. 다른 많은 준비에 적합한 패치 클램프 녹음 장비 및 소프트웨어는 또한 Drosophila의 배아에서 녹음에 적합합니다. Drosophila의 ?…

Discussion

Drosophila의 배아에서 Electrophysiological 녹음 수동 조작과 절개를 필요로합니다. 준비의 건강과 레코딩의 결과의 품질, 신속하고 깔끔하게 레코딩을위한 연약한 배아 조직을 준비하는 수있는 하나 따라 다음 실험을 실행합니다. 경험은 한번에 모두를 해결하기 위해 시도하기 전에 배아 해부 및 패치 클램프 전기 생리학 모두 실력해야합니다.

녹음은 "수정된 표준"?…

Divulgazioni

The authors have nothing to disclose.

Acknowledgements

킬로바이트는 NIH 부여 GM54544에 의해 지원됩니다.

Riferimenti

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Citazione di questo articolo
Chen, K., Featherstone, D. E., Broadie, K. Electrophysiological Recording in the Drosophila Embryo. J. Vis. Exp. (27), e1348, doi:10.3791/1348 (2009).
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