Summary

Geboren Normalisierung für Fluoreszenz-Optical Projection Tomographie für ganzem Herzen Imaging

Published: June 02, 2009
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Summary

Wir empfehlen Ihnen einen Born normalisierten Ansatz für Optical Projection Tomographie (BnOPT), die für die Absorptionseigenschaften des abgebildeten Proben Konten, um genaue und quantitative Fluoreszenz-tomographischen Rekonstruktionen zu erhalten. Wir verwenden den vorgeschlagenen Algorithmus, um die Fluoreszenz molekulare Sonde Verteilung innerhalb kleiner tierischer Organe zu rekonstruieren.

Abstract

Optische Projektions-Tomographie wird ein dreidimensionales bildgebendes Verfahren, das erst kürzlich als Imaging-Tool vor allem in der Entwicklungsbiologie und der Genexpression Studien eingeführt. Die Technik macht biologischen Probe optisch transparent, indem Sie zunächst entwässert und dann zur Überführung in eine Mischung aus Benzylalkohol und Benzylbenzoat in einem Verhältnis von 2:1 (BABB oder Murray s Klare Lösung). Die Technik macht biologischen Proben optisch transparent, indem Sie zunächst entwässert in abgestuften Ethanollösungen sie dann in eine Mischung aus Benzylalkohol und Benzylbenzoat in einem Verhältnis von 2:1 (BABB oder Murray s Klare Lösung) zu klären. Nach dem Clearing-Verfahren der Streuung Beitrag in der Probe kann stark reduziert werden und machte fast vernachlässigbar, während die Absorption Beitrag kann nicht vollständig ausgeschlossen werden. Beim Versuch, die Fluoreszenz-Verteilung innerhalb der zu untersuchenden Probe zu rekonstruieren, wirkt sich dieser Beitrag die Rekonstruktionen und führt zwangsläufig zu Bildartefakte und Quantifizierung Fehler .. Während Absorption konnte weiter mit einer Dauer von Wochen oder Monaten in der Lichtung Medien reduziert werden, wird dies zu einem fortschreitenden Verlust der Fluoreszenz und eine unrealistisch lange Probe Bearbeitungszeit führen. Dies gilt sowohl bei der Rekonstruktion exogenen Kontrastmitteln (molekulare Kontrastmittel) sowie endogene Kontrast (zB Rekonstruktionen von gentechnisch ausgedrückt fluoreszierenden Proteinen).

Protocol

Bildgebendes Verfahren Der Versuchsaufbau ist im Detail in Abbildung 1 dargestellt. Eine Lichtquelle LS dient sowohl als Beleuchtung für Absorptionsmessungen und als Anregungsquelle für Fluoreszenz-Messungen und es ist mit einem schmalen Bandpass-Interferenzfilter BPF gefiltert. Eine Reihe von festen und variablen Neutralfilter ND mit dem Vorhandensein einer automatischen Blende S ermöglichen, die Menge an Licht auf die Probe zu kontrollieren und halten Sie sie niedrig genug, um jede Ausble…

Acknowledgements

C. Vinegoni dankt für die Unterstützung von National Institutes of Health (NIH) gewähren 1-RO1-EB006432.

Riferimenti

  1. Sharpe, J., Ahlgren, U., Perry, P., Hill, B., Ross, A., Hecksher-Sorensen, J., Baldock, R., Davidson, D. Optical projection tomography as a tool for 3D microscopy and gene expression studies. Science. 296, 541-544 (2002).
  2. Lee, K., Avondo, J., Morrison, H., Blot, L., Stark, M., Sharpe, J., Bangham, A., Coen, E. Visualizing plant development and gene in three dimensions using optical projection tomography. Plant Cell. 18, 2145-2156 (2006).
  3. Oldham, M., Sakhalkar, H., Wang, Y. M., Guo, P. Y., Oliver, T., Bentley, R., Vujaskovic, Z., Dewhirst, M. Three-dimensional imaging of whole rodent organs using optical computed and emission tomography. J. Biomed. Opt. 12, 1-10 (2007).
  4. Ntziachristos, V., Weissleder, R. Experimental three-dimensional fluorescence reconstruction of diffuse media by use of a normalized Born approximation. Opt. Lett. 26, 893-895 (2001).
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Citazione di questo articolo
Vinegoni, C., Razansky, D., Figueiredo, J., Fexon, L., Pivovarov, M., Nahrendorf, M., Ntziachristos, V., Weissleder, R. Born Normalization for Fluorescence Optical Projection Tomography for Whole Heart Imaging. J. Vis. Exp. (28), e1389, doi:10.3791/1389 (2009).

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