初压雌核发育二倍体的斑马鱼
Summary
这是一个产生阻塞后，立即用紫外线灭活精子受精的第二次减数分裂雌核发育二倍体斑马鱼的胚胎（仅来自母亲的遗传贡献的胚胎）的方法。 EP胚胎是不完全纯合的，由于在第一次减数分裂重组，但他们是在所有尚未从他们的着丝粒分离，通过重组位点纯合子。
Abstract
二倍体真核生物的杂合性，往往使繁琐的遗传研究。从杂合子女性产生直接可行的纯合二倍体后代的方法，让有害突变，直接在加速向前遗传屏幕的F1诱变女性进行甄别。 Streisinger等人。<sup> 1,2</sup>描述的方法，使雌核发育二倍体（合子）的斑马鱼，斑马鱼的卵用紫外线灭活精子激活使用物理疗法（热或压力），deploymerize微管和防止第二次减数分裂或第一合子细胞分裂。 “初压（EP）的方法将阻塞在减数分裂II，它在受精后不久发生。 EP方法产生一个可行的胚胎的比例较高，可以发展到肥沃的成年人，雌雄兼用。该方法生成的胚胎，除了那些在减数分裂一纯合突变是在EP离合器之间的着丝粒基因位点的50％和小于1％的端粒基因位点检测，通过重组，从他们的着丝粒分离所有位点纯合子。这种方法是复制逐字从斑马鱼书<sup> 3</sup>。
Protocol
Discussion
重要的是要确保用这种方法产生的胚胎，是真正的雌核发育二倍体。作为对照，产生了正常的二倍体卵子（保持预留一些无紫外线灭活精子）和单倍体胚胎（保持不通过EP程序预留的紫外线精子受精卵离合器）离合器的离合器。在1天受精后单倍体胚胎体轴短，不规则的脑和体节的形态。单倍体是不是可行，经过2-3天。 EP二倍体应该看起来像正常的二倍体，虽然一些不规则的“EP怪物”可能会发生?…
Acknowledgements
Charline沃克在乔治Streisinger的实验室在俄勒冈大学在20世纪70年代和80年代开发的斑马鱼，在体外受精和雌核发育二倍体的方法。这里所描述的方法是从Charline的协议，该协议是在斑马鱼图书 3不变。
Charline沃克在乔治Streisinger的实验室在俄勒冈大学在20世纪70年代和80年代开发的斑马鱼，在体外受精和雌核发育二倍体的方法。这里所描述的方法是从Charline的协议，该协议是在斑马鱼图书 3不变。
Materials
| Material Name | Tipo | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| Tricaine | Sigma | |||
| Watch glass | ||||
| French Press | ||||
| Pressure cylinder | ||||
| Instant ocean | ||||
| Pasteur pipettes | Cut off the narrow end, fire polish | |||
| UV cross-linker | ||||
| microcapillaries |
Riferimenti
- Streisinger, G. Segregation analyses and gene-centromere distances in zebrafish. Genetica. 112 (2), 311-311 (1986).
- Streisinger, G. Production of clones of homozygous diploid zebra fish (Brachydanio rerio). Nature. 291 (5813), 293-293 (1981).
- Westerfield, M. . The Zebrafish Book: A guide for the laboratory use of zebrafish (Danio rerio). , (2000).
- Johnson, S. L., Africa, D., Horne, S., Postlethwait, J. H. Half-tetrad analysis in zebrafish: mapping the ros mutation and the centromere of linkage group I. Genetica. 139 (4), 1727-1727 (1995).
- Beattie, C. E., Raible, D. W., Henion, P. D., Eisen, J. S. Early pressure screens. Methods Cell Biol. 237 (71), 2575-25 (1999).
- Johnson, S. L. Centromere-linkage analysis and consolidation of the zebrafish genetic map. Genetica. 142 (4), 1277-1277 (1996).
- Trede, N. S. Zebrafish mutants with disrupted early T-cell and thymus development identified in early pressure screen. Dev Dyn. 237 (9), 2575-2575 (1999).
