ביצוע דיפלואידי דג הזברה Gynogenetic על ידי לחץ מוקדמת
Summary
זוהי שיטה להפקת דיפלואידי gynogenetic עוברי דג הזברה (אשר עוברים רק תרומה גנטית מגיע מהאם) על ידי חסימת חלוקת meiotic מחרה מחזיק אחריה מיד לאחר ההפריה עם זרע אור אולטרה סגול מומת. עוברים EP אינם הומוזיגוטים במלואה עקב רקומבינציה במהלך החלוקה meiotic הראשון, אולם הם הומוזיגוטים בכלל לוקוסים שלא היה מופרד centromere שלהם על ידי רקומבינציה.
Abstract
Heterozygosity אאוקריוטים דיפלואידי לעתים קרובות גורם מחקרים גנטיים מסורבלת. שיטות המייצרים דיפלואידי קיימא צאצאים הומוזיגוטים ישירות מן הנקבות הטרוזיגוטיים לאפשר לנשים mutagenized F1 כדי להיות מוקרן ישירות למסך גנטי קדימה מואצת מוטציות מזיקות. Streisinger et al.<sup> 1,2</sup> תיאר שיטות להכנת gynogenetic (הומוזיגוטים) דג הזברה דיפלואידי ידי הפעלת ביצי דג הזברה עם זרע אור אולטרה סגול מומת ומניעת גם את meiotic השני או הדיוויזיה הראשונה תא zygotic באמצעות טיפולים פיזיים (חום או לחץ) כי microtubules deploymerize. "הלחץ מוקדם" (EP) בלוקים השיטה השנייה המיוזה, אשר מתרחשת זמן קצר לאחר ההפריה. השיטה EP מייצרת אחוז גבוה של עוברים קיימא שיכול להתפתח למבוגרים פורה משני המינים. השיטה יוצרת בעוברים שהם הומוזיגוטים בכל לוקוסים למעט אלה הופרדו centromere שלהם על ידי רקומבינציה במהלך המיוזה הראשונה מוטציות הומוזיגוטים מזוהים ב מצמדים EP בבית בין 50% ל לוקוסים centromeric ופחות מ -1% עבור לוקוסים telomeric. שיטה זו היא להעתיק מילה במילה מתוך הספר דג הזברה<sup> 3</sup>.
Protocol
Discussion
חשוב לוודא כי עוברי המיוצר על ידי שיטה זו diploids gynogenetic נכון. כמו שולטת, ליצור מקבץ הביצים דיפלואידי נורמלי (על ידי שמירה על הצידה כמה זרע ללא איון-UV) ואת המצמד של עוברים הפלואידים (על ידי שמירה בצד מקבץ של ביציות מופרות עם זרע UV מבלי לעבור דרך ההליך EP). ב 1 הודעה יום עוברים ?…
Acknowledgements
שיטות הפריה חוץ גופית ו diploids gynogenetic פותחו על ידי דג הזברה Charline ווקר במעבדה של ג'ורג' Streisinger באוניברסיטת אורגון ב -1970 ו -1980. השיטה המתוארת כאן היא ללא שינוי לעומת פרוטוקולים של Charline אשר זמינים במלואם בספר דג הזברה 3.
שיטות הפריה חוץ גופית ו diploids gynogenetic פותחו על ידי דג הזברה Charline ווקר במעבדה של ג'ורג' Streisinger באוניברסיטת אורגון ב -1970 ו -1980. השיטה המתוארת כאן היא ללא שינוי לעומת פרוטוקולים של Charline אשר זמינים במלואם בספר דג הזברה 3.
Materials
| Material Name | Tipo | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| Tricaine | Sigma | |||
| Watch glass | ||||
| French Press | ||||
| Pressure cylinder | ||||
| Instant ocean | ||||
| Pasteur pipettes | Cut off the narrow end, fire polish | |||
| UV cross-linker | ||||
| microcapillaries |
Riferimenti
- Streisinger, G. Segregation analyses and gene-centromere distances in zebrafish. Genetica. 112 (2), 311-311 (1986).
- Streisinger, G. Production of clones of homozygous diploid zebra fish (Brachydanio rerio). Nature. 291 (5813), 293-293 (1981).
- Westerfield, M. . The Zebrafish Book: A guide for the laboratory use of zebrafish (Danio rerio). , (2000).
- Johnson, S. L., Africa, D., Horne, S., Postlethwait, J. H. Half-tetrad analysis in zebrafish: mapping the ros mutation and the centromere of linkage group I. Genetica. 139 (4), 1727-1727 (1995).
- Beattie, C. E., Raible, D. W., Henion, P. D., Eisen, J. S. Early pressure screens. Methods Cell Biol. 237 (71), 2575-25 (1999).
- Johnson, S. L. Centromere-linkage analysis and consolidation of the zebrafish genetic map. Genetica. 142 (4), 1277-1277 (1996).
- Trede, N. S. Zebrafish mutants with disrupted early T-cell and thymus development identified in early pressure screen. Dev Dyn. 237 (9), 2575-2575 (1999).
