初期の圧力による雌性発生二倍体のゼブラフィッシュを作成
Summary
これは、すぐに紫外線で不活化精子と受精した後、第二減数分裂をブロックすることにより、雌性発生二倍体のゼブラフィッシュの胚（遺伝のみ寄与母親由来胚）を生成するための方法です。 EPの胚は、最初の減数分裂時の組換えが原因で完全にホモ接合体ではない、しかし、彼らは再結合することにより、動原体から分離されていないすべての遺伝子座でホモ接合である。
Abstract
二倍体真核生物におけるヘテロ接合性は、しばしば遺伝学的研究が面倒になります。ヘテロ接合の雌から直接実行可能なホモ接合二倍体の子孫を生成するメソッドは、F1変異女性が加速フォワード遺伝学的スクリーニングに有害な突然変異を直接スクリーニングすることができます。 Streisingerら。<sup> 1,2</sup>は、紫外線不活化精子とゼブラフィッシュ卵を活性化し、物理的処理（熱または圧力）そのdeploymerize微小管を使用して第二減数または最初の接合子の細胞分裂のどちらかを防ぐことによって、雌性発生（ホモ接合）二倍体のゼブラフィッシュを作製するための方法を説明した。 "初期の圧力"（EP）メソッドは、受精直後に起こる減数分裂IIを、ブロックします。 EP法は、いずれの性の肥沃な大人に開発することができます実行可能な胚の割合が高い生成します。方法は、減数分裂I.ホモ接合体の変異がセントロメア遺伝子座は50％とテロメア遺伝子座のための1％未満の間でEPのクラッチで検出された際に再結合することにより、動原体から分離されたものを除き、すべての遺伝子座でホモ接合である胚を生成します。このメソッドは、ゼブラフィッシュ帳からそのまま再現されている<sup> 3</sup>。
Protocol
Discussion
この方法により製造された胚は、真の雌性発生二倍体であることを確認することが重要です。コントロールとして、通常の二倍体の卵（UV不活化せずに精子のいくつかを取っておくことにより）と一倍体の胚（EPの手順を経由せずにUV精子で受精卵のクラッチを脇に保つことによって）のクラッチのクラッチを生成する。 1日の後の受精の一倍体胚ではショートボディの軸、不規則な脳と体節?…
Acknowledgements
体外受精と雌性発生二倍体のための方法は1970年代と1980年代にオレゴン大学のジョージStreisingerの研究室でシャーリーンウォーカーによるゼブラフィッシュのために開発されました。方法は、ここで説明ゼブラブック3で完全に利用可能であるシャーリーンのプロトコルから変更されていません。
体外受精と雌性発生二倍体のための方法は1970年代と1980年代にオレゴン大学のジョージStreisingerの研究室でシャーリーンウォーカーによるゼブラフィッシュのために開発されました。方法は、ここで説明ゼブラブック3で完全に利用可能であるシャーリーンのプロトコルから変更されていません。
Materials
| Material Name | Tipo | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| Tricaine | Sigma | |||
| Watch glass | ||||
| French Press | ||||
| Pressure cylinder | ||||
| Instant ocean | ||||
| Pasteur pipettes | Cut off the narrow end, fire polish | |||
| UV cross-linker | ||||
| microcapillaries |
Riferimenti
- Streisinger, G. Segregation analyses and gene-centromere distances in zebrafish. Genetica. 112 (2), 311-311 (1986).
- Streisinger, G. Production of clones of homozygous diploid zebra fish (Brachydanio rerio). Nature. 291 (5813), 293-293 (1981).
- Westerfield, M. . The Zebrafish Book: A guide for the laboratory use of zebrafish (Danio rerio). , (2000).
- Johnson, S. L., Africa, D., Horne, S., Postlethwait, J. H. Half-tetrad analysis in zebrafish: mapping the ros mutation and the centromere of linkage group I. Genetica. 139 (4), 1727-1727 (1995).
- Beattie, C. E., Raible, D. W., Henion, P. D., Eisen, J. S. Early pressure screens. Methods Cell Biol. 237 (71), 2575-25 (1999).
- Johnson, S. L. Centromere-linkage analysis and consolidation of the zebrafish genetic map. Genetica. 142 (4), 1277-1277 (1996).
- Trede, N. S. Zebrafish mutants with disrupted early T-cell and thymus development identified in early pressure screen. Dev Dyn. 237 (9), 2575-2575 (1999).
