Hacer pez cebra Gynogenetic diploides por presión inicial
Summary
Este es un método para la generación de embriones de pez cebra gynogenetic diploide (embriones, cuya única contribución genética proviene de la madre) por el bloqueo de la segunda división meiótica inmediatamente después de la fertilización con luz ultravioleta inactiva los espermatozoides. EP embriones no son totalmente homocigotos debido a la recombinación en la primera división meiótica, sin embargo, son homocigotos en todos los lugares que no han sido separados de sus centrómero por recombinación.
Abstract
Heterocigosidad en eucariotas diploides a menudo hace que los estudios genéticos engorroso. Métodos que producen descendencia viable diploides homocigóticos directamente de las mujeres heterocigotas permite F1 hembras mutadas que se proyectarán directamente de mutaciones deletéreas en una pantalla acelerado avance genético. Streisinger et al.<sup> 1,2</sup> Describe los métodos para la toma de gynogenetic (homocigotos) pez cebra diploide mediante la activación de los huevos de pez cebra con la luz ultravioleta inactiva los espermatozoides y la prevención sea la segunda meiosis o la primera división celular cigóticos el uso de tratamientos físicos (calor o presión) que los microtúbulos deploymerize. La "presión inicial" (EP) método se bloquea la meiosis II, que se produce poco después de la fecundación. El método EP produce un alto porcentaje de embriones viables que se pueden desarrollar a adultos fértiles de ambos sexos. El método genera embriones que son homocigotos en todos los lugares excepto aquellos que fueron separados de sus centrómero por la recombinación durante la meiosis I. mutaciones homocigóticas se detectan en las garras del Parlamento Europeo entre el 50% de loci centromérica y menos del 1% para los loci telomérica. Este método se reproduce textualmente del Libro de pez cebra<sup> 3</sup>.
Protocol
Discussion
Es importante asegurarse de que los embriones producidos por este método son diploides cierto gynogenetic. Como controles, generar una nidada de huevos diploides normales (al mantener a un lado algunos de los espermatozoides sin UV-inactivación) y un grupo de embriones haploides (por un lado mantener una nidada de huevos fecundados con el esperma de UV, sin pasar por el procedimiento de EP). En un mensaje embriones haploides días de fertilización tienen un eje cuerpo corto, el cerebro y la morfología irregular somi…
Acknowledgements
Los métodos para la fertilización in vitro y diploides gynogenetic fueron desarrollados para el pez cebra por Charline Walker en el laboratorio de George Streisinger en la Universidad de Oregon en los años 1970 y 1980. El método descrito aquí no ha cambiado desde los protocolos de Charline que están disponibles en su totalidad en el Libro de pez cebra 3.
Los métodos para la fertilización in vitro y diploides gynogenetic fueron desarrollados para el pez cebra por Charline Walker en el laboratorio de George Streisinger en la Universidad de Oregon en los años 1970 y 1980. El método descrito aquí no ha cambiado desde los protocolos de Charline que están disponibles en su totalidad en el Libro de pez cebra 3.
Materials
| Material Name | Tipo | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| Tricaine | Sigma | |||
| Watch glass | ||||
| French Press | ||||
| Pressure cylinder | ||||
| Instant ocean | ||||
| Pasteur pipettes | Cut off the narrow end, fire polish | |||
| UV cross-linker | ||||
| microcapillaries |
Riferimenti
- Streisinger, G. Segregation analyses and gene-centromere distances in zebrafish. Genetica. 112 (2), 311-311 (1986).
- Streisinger, G. Production of clones of homozygous diploid zebra fish (Brachydanio rerio). Nature. 291 (5813), 293-293 (1981).
- Westerfield, M. . The Zebrafish Book: A guide for the laboratory use of zebrafish (Danio rerio). , (2000).
- Johnson, S. L., Africa, D., Horne, S., Postlethwait, J. H. Half-tetrad analysis in zebrafish: mapping the ros mutation and the centromere of linkage group I. Genetica. 139 (4), 1727-1727 (1995).
- Beattie, C. E., Raible, D. W., Henion, P. D., Eisen, J. S. Early pressure screens. Methods Cell Biol. 237 (71), 2575-25 (1999).
- Johnson, S. L. Centromere-linkage analysis and consolidation of the zebrafish genetic map. Genetica. 142 (4), 1277-1277 (1996).
- Trede, N. S. Zebrafish mutants with disrupted early T-cell and thymus development identified in early pressure screen. Dev Dyn. 237 (9), 2575-2575 (1999).
