이 비디오 기사는 양질의 형광을 달성하기 위해 정액 샘플을 처리하는 방법을 단계적으로, 설명<em> 현장에서</em인간 마리의 정자 수야에> 하이브 리다이 제이션. 얻은 준비는 임상 진단의 맥락에서 aneuploidy 심사 사용할 수 있습니다.
Abstract
Aneuploidies은 인간에서 가장 자주 염색체 이상입니다. 이러한 이상의 대부분은 부모의 gametogenic 과정 meiotic 오류로 인한. 인간의 남성에서 이러한 오류가 자손에게 이러한 이례적인 전송의 증가 위험을 나타내는 수치 염색체 이상과 마리의 정자 수야의 생산으로 이어질 수 있습니다.
이러한 이유로, 정자의 핵에 원위치 하이브리드화 (물고기)의 형광의 기술은 광범위하게 임상 진단의 맥락에 통합 프로토콜되고있다. 이러한 행위는 유전자의 생식 조언을 추구 환자의 gametes의 수치 염색체 이상의 주파수의 예측을 제공합니다.
지금까지 대부분의 자주 정자 생선 분석에 포함된 염색체는 염색체 X, Y, 13, 18과 21입니다.
이 비디오 문서에서는 어떻게 현미경의 결과를 시각화하는 방법에 정자 물고기 준비를 얻기 위해 진행 정자 염색질을 decondense 및 변성하는 방법, 인간의 정액 샘플을 처리하고 해결하는 방법을 단계적으로, 그리고 설명합니다. 가장 관련성이 높은 단계의 특별 연설은 최상의 결과를 달성하기 위해 주어집니다.
Protocol
I. 샘플 처리 및 세포 고정 액화까지 20 분 실온에서 멸균 용기에 정액 샘플을 둡니다. 원심 분리기 튜브에 샘플을 전송하고 5 분 1천그램에 그것을 돌린다. 부드럽게 파스퇴르 피펫을 사용하여 표면에 뜨는를 제거하고 폐기. hypotonic 솔루션을 추가 (KCl, 0.075M) 미리 가열 10 ML의 최종 볼륨을 얻기 위해 소용돌이에 혼합하는 동안, 37 ° C 드롭에 의해 드롭. 37 물 목?…
Discussion
이 프로토콜은 정자 물고기 준비를위한 인간의 정액 샘플을 처리하는 방법에 대해 설명합니다. 이 프로토콜을 사용하면 남성의 염색체 이상 gametes를 분석하는 것이 가능합니다. 마리의 정자 수야 aneuploidy 심사는 기초 연구의 맥락과 불임 남성에게 주어진 생식 조언에 두 응용 프로그램이 있습니다. 임상 진단에 가장 널리 연구 염색체는 X, Y, 13, 18 및 21 염색체와 loci 광범위한 다른 상용 프로브은 ?…
Divulgazioni
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
이 작품은 Generalitat 드 Catalunya (2005 – SGR00437)에 의해 지원되었다. 저자는 그들의 자신의 기술 지원에 대한 감독과 격려, 그리고 J. 루카스에 대한 J. 블랑코와 F. 비달에 감사드립니다.
Materials
Material Name
Tipo
Company
Catalogue Number
Comment
1,4-Dithiothreitol (DTT)
Material
Roche
10197777001
2-Amino-2-(hydroxymethyl)-1,3-propanediol
Material
Roche
10708976001
Acetic acid
Material
Merck
100.063
AneuVysion® Multicolor DNA Probe Kit
20xSaline-Sodium Citrate
4,6-diamidino-2-phenylindole (DAPI II)
CEP 18/X/Y DNA probe
NP-40
LSI 13/21 DNA probe
Material
Vysis Inc.
32-161075
30-805850
30-804941
30-171077
30-804820
30-171078
Centrifuge 5804R
Tool
Eppendorf
Centrifuge tube
Material
Nunc
347856
Coplin jar (glass)
Material
Barloworld Scientific
Hellendahl (ZCT278)
Coplin jar (plastic)
Material
Deltalab
191087
Cover slips (15×15)
Material
Knittel gläser
4600115
Cover slips (18×18)
Material
Knittel gläser
4600118
Diamond pencil
Material
Hammacher
335117010
Ethanol
Material
Merck
100.983
Formamide
Material
Roche
11814320001
Freezer
Tool
Zanussi
Gloves
Material
Sanyc
101/3300
HYBrite™
Tool
Vysis Inc.
Immersion Oil
Material
Olympus
35505
Incubator
Tool
Heraeus
Methanol
Material
Merck
106.009
Micropipette
Material
Labsystems
Finnpipette (4500000)
Micropipette replacement tip
Material
Daslab
16-2001
Nail varnish
Material
Quo-cosmetics
Olympus BX60 epifluorescence microscope
Tool
Olympus
Equipped with a triple-band filter for DAPI/Texas Red/FITC and single-band filters for Aqua, FITC and Texas Red.