Rening av mitokondrier från jästceller
Summary
Vi beskriver en snabb och effektiv metod för rening av mitokondrier från jästen<em> Saccharomyces cerevisiae</em>. Denna metod gör att den högavkastande isolering av ren mitokondrier som är väsentligen fri från föroreningar av andra organeller och behålla sina strukturella och funktionella integritet efter rening.
Abstract
Mitokondrierna är den största anläggningen av ATP produktion under aerob metabolism i eukaryota icke-fotosyntetiserande celler<sup> 1</sup>. Dessa komplexa organeller spelar också viktiga roller i apoptotiska celldöd<sup> 2</sup>, Cellöverlevnad<sup> 3</sup>, Däggdjur utveckling<sup> 4</sup>, Neuronal utveckling och funktion<sup> 4</sup>, Intracellulär signalering<sup> 5</sup>, Och livslängd reglering<sup> 6</sup>. Vår förståelse av dessa komplexa biologiska processer styrs av mitokondrier bygger på robusta metoder för att bedöma deras morfologi, deras protein och fett sammansättning, integriteten i deras DNA, och deras många vitala funktioner. Den spirande jäst<em> Saccharomyces cerevisiae</em>, Är en genetiskt och biokemiskt bökbart encelliga eukaryota med kommenterade genomet och väldefinierade Proteome, en värdefull modell för att studera molekylära och cellulära mekanismer som ligger bakom viktiga biologiska funktioner i mitokondrier. För dessa typer av studier är det viktigt att ha mycket rena mitokondrier. Här presenterar vi en detaljerad beskrivning av en snabb och effektiv metod för rening av jäst mitokondrier. Denna metod möjliggör isolering av mycket rena mitokondrier som är väsentligen fri från föroreningar av andra organeller och behålla sina strukturella och funktionella integritet efter rening. Mitokondrier renas genom denna metod är lämpliga för cellfria beredning av viktiga mitokondrie-processer och kan användas för analys av mitokondrie-struktur och funktioner, mitokondrie Proteome och lipidome, och mitokondrie-DNA.
Protocol
Discussion
Denna metod gör att den högavkastande isolering av rena mitokondrier från jästceller. Mitokondrier renas genom denna metod är i huvudsak fri från föroreningar av andra organeller och behålla sina strukturella och funktionella integritet efter rening. Den beskrivna metoden ger mitokondrier som är lämpliga för cellfria beredning av viktiga mitokondriella processer. Dessa mycket rena mitokondrier kan också användas för analys av mitokondrie-struktur och funktioner, mitokondrie Proteome och lipidome, och mitok…
Divulgazioni
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Detta arbete har finansierats med bidrag från CIHR och NSERC av Kanada. VIT är en CIHR ny undersökare och Concordia University forskning ordförande i genomik, cellbiologi och åldrande.
Riferimenti
- Voet, D., Voet, J. G. Biochemistry. , (2004).
- Suen, D. -. F., Norris, K. L., Youle, R. J. Mitochondrial dynamics and apoptosis. Genes Dev. 22, 1577-1590 (2008).
- Cheng, W. C., Berman, S. B., Ivanovska, I., Jonas, E. A., Lee, S. J., Chen, Y., Kaczmarek, L. K., Pineda, F. &. a. m. p. ;. a. m. p., Hardwick, J. M. Mitochondrial factors with dual roles in death and survival. Oncogene. 25, 4697-4705 (2006).
- Detmer, S. A., Chan, D. C. Functions and dysfunctions of mitochondrial dynamics. Nat. Rev. Mol. Cell Biol. 8, 870-879 (2007).
- McBride, H. M., Neuspiel, M., Wasiak, S. Mitochondria: more than just a powerhouse. Curr. Biol. 16, R551-R560 (2006).
- Balaban, R. S., Nemoto, S., Finkel, T. Mitochondria, oxidants, and aging. Cell. 120, 483-495 (2005).
