Denna video visar hur man kan mäta cell invasion genom insatser cellodling med hjälp av en fluorescens-baserad metod.
Det kännetecknande för metastaserande celler är deras förmåga att invadera igenom basalmembranet och migrera till andra delar av kroppen. Cellerna måste kunna både utsöndra proteaser som bryter ner basalmembranet samt migrera för att vara invasiva. BD BioCoat tumör Invasion System ger celler med villkor som möjliggör bedömning av deras invasiva egendom<em> In vitro</em<sup> 1,2</sup>. Den består av en BD Falcon FluoroBlok 24-multispot Sätt tavla med ett 8,0 micron porstorlek PET-membran som har varit jämnt belagda med BD Matrigel Matrix. Denna enhetliga lager av BD Matrigel Matrix fungerar som en rekonstruerad basalmembran<em> In vitro</em> Ger en sann hinder för icke-invasiva celler medan presenterar en lämplig proteinstruktur att studera invasion. Beläggningen processen occludes porerna i membranet, blockera icke-invasiva celler från vandrar genom membranet. Däremot invasiva celler kan lösgöra sig från och vandrar genom den belagda membranet. Kvantifiering av cell invasion kan uppnås genom att antingen före eller efter-cells invasionen märkning med en fluorescerande färg som DiIC<sub> 12</sub> (3) eller kalcein AM respektive och mäta fluorescens invaderande celler. Eftersom BD FluoroBlok membranet effektivt blockerar passagen av ljuset från 490 till 700 nm vid> 99% effektivitet, fluorescerande-märkta celler som inte har invaderat inte upptäcks av en bottom-läsning fluorescens plattläsaren. Däremot är celler som har invaderat på undersidan av membranet inte längre skyddade från ljuskällan och detekteras med respektive plattläsaren. Denna video visar en slutpunkt analys cell invasion, med hjälp av kalcein AM för att upptäcka invaderade celler.
The authors have nothing to disclose.
Material Name | Tipo | Company | Catalogue Number | Comment |
---|---|---|---|---|
BD BioCoat Tumor Invasion System | BD Biosciences | 354165 or 354166 | ||
HT-1080 and NIH/3T3 cells | ATCC | |||
Dulbecco’s Modified Eagle Medium (DMEM; serum-free) | ||||
Dulbecco’s Phosphate Buffered Saline, without calcium and magnesium (DPBS) | ||||
BD Falcon FluoroBlok 24-Multiwell Insert System to be used as a cell migration control | BD Biosciences | 351157 or 351158 | ||
5% Fetal Bovine Serum in DMEM | ||||
BD Calcein AM Fluorescent Dye | BD Biosciences | 354216 or 354217 | ||
Hanks’ Balanced Salt Solution (HBSS) | ||||
BD Falcon 24-well plates for post cell invasion labeling | BD Biosciences | 351147 | ||
Fluorescence plate reader with bottom reading capabilities | PerkinElmer EnVision (R), TECAN Infinite (R), Molecular Devices SpectraMax (R), BioTek Synergy (TM), BMG LABTECH PHERAstar. |