可视化单分子络合物在体内使用高级荧光显微
Summary
在这里，我们展示了单分子荧光显微镜，对生活的细菌细胞，使功能分子复合物进行检测，跟踪和量化的执行协议。
Abstract
全面洞察到活细胞的机制，可以实现只有通过调查的关键工序引出并直接在细胞水平上的事件。迄今为止的生物系统的剪切复杂性造成了精确的单分子实验过于苛刻，而不是单一系统使用相对粗糙的散装合奏平均测量的研究重点。然而，许多重要的过程发生在活细胞只是一个水平或几个分子;合奏测量一般掩盖这些事件的随机性和异质性。在这里，使用先进的光学显微镜和分析图像分析工具，我们演示了如何在一个单一的生活细菌细胞的单个分子的精确度，以及如何运作的生物机器，我们可以观察到分子复合物内的动态监测的蛋白质。该技术直接相关的生理。他们微创微扰和非侵入性正在研究的生物样品，并完全合拍，在物质生活的调查功能，没有现成的其他单分子生物物理的方法。此外，生物标本研究所有在未修改的细胞株（“基因组编码”），产生显着更多的蛋白质比自然发生的，而不是比较常见的，但不太理想的方法几乎相同的水平产生荧光标记的蛋白质（“质粒表达”）。因此，将调查的实际生物样品中有显着接近自然的有机体，因此观测真正的生理过程有关。
Protocol
Discussion
必须小心不要“剪切”拴细菌细胞，因为这可能会损害鞭毛马达的功能。重要的是使用细胞的显微镜玻片上一次更长的时间不到一个小时，因为他们可能成为氧气耗尽。可能需要相当大的优化，正在调查中找到最好的显微镜成像条件满足您特定的生物系统。这可能是明智的做法是企图用纯化GFP的单独确定正确的强度激光激发您的特殊的显微镜系统所需的成像。
Divulgazioni
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
我们承认，从教授朱迪思阿米蒂奇（英国牛津大学）和康拉德Mullineaux教授（英国伦敦大学玛丽皇后学院）组菌株的实物捐赠。 IMD是共同出资的生物化学部（牛津大学）和OCISB; AR是由工程和物理科学研究理事会（EPSRC）的DTC的助学金的资助; ND是从生物技术和生物科学研究理事会（BBSRC）资助; MCL由英国皇家学会大学研究奖学金。
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