Выделение и животных Сыворотка свободного расширения прав пуповины производных мезенхимальных стромальных клеток (МСК) и эндотелиальных колонии Формирование клеток-предшественников (ECFCs)
Этот протокол описывает изоляцию и последующее расширение мезенхимальных стромальных клеток и эндотелиальных клеток, образующих колонии без использования животного сыворотку для получения аутологичных пар в экспериментальных целях трансплантации.
Abstract
Пуповины является богатым источником для клеток-предшественников, с высокой пролиферативной потенциал в том числе мезенхимальных стромальных клеток (также называемые мезенхимальные стволовые клетки, МСК) и эндотелиальных колониеобразующих клеток-предшественников (ECFCs). Оба типа клеток играют ключевую роль в поддержании целостности ткани и, вероятно, также участвует в восстановительных процессов и опухолей.
Для изучения их биологии и функции в сравнительной образом, важно иметь оба типа клетки можно получить и того же донора. Он также может быть полезным для восстановительных целей для получения МСК и ECFCs из той же ткани.
Поскольку сотовая терапии в конечном счете должны найти свой путь от скамьи к постели мы создали новый метод для изоляции и дальнейшему расширению клеток-предшественников, без использования животного белка. Объединенные человека лизат тромбоцитов (pHPL) заменил эмбриональной телячьей сыворотки на всех этапах нашего протокола, чтобы полностью избежать контакта клетки ксеногенных белков.
Это видео демонстрирует методику выделения и расширение клеток-предшественников из одной пуповины.
Все материалы и процедуры будут описаны.
Protocol
Часть 1: Настройка 1. Подготовка клеточной среде культуры Перед тем как начать подготовку среду собрать все материалы и инструменты вам понадобятся. Оттепель 2 х 56 мл аликвоты объединенных тромбоцитов человека лизат (pHPL, самодельные: ссылка 1 и Юпитер # 1523),…
Discussion
Существует множество источников, из которых, чтобы получить МСК или ECFCs в том числе костного мозга, жировой ткани, пуповинной крови и т.д.
Необходимо, чтобы получить оба типа прародителей из того же источника напрямую сравнивать участия различных типов клеток в процессах…
Divulgazioni
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Авторы выражают благодарность Катарина Schallmoser за предоставление pHPL, Ева и Николь Роде Хофманн за полезные замечания к рукописи, Даниэла Талер и Маргарета отец hwirth для оказания технической помощи, Моника Фаррелл языковых редактирования, Уве Ланг, Маргит Хольцапфель и Сандра Eppich на кафедра акушерства за предоставление шнуры.
Эта работа была поддержана австрийским исследовательского фонда (FWF, грант N211-NAN для DS), Австрийское агентство по продвижению научных исследований (FFG, грант N200 для DS), так и взрослых стволовых клеток исследовательского фонда (AR). AR является членом программы кандидата молекулярной медицины Медицинского университета Граца.
Reinisch, A., Strunk, D. Isolation and Animal Serum Free Expansion of Human Umbilical Cord Derived Mesenchymal Stromal Cells (MSCs) and Endothelial Colony Forming Progenitor Cells (ECFCs). J. Vis. Exp. (32), e1525, doi:10.3791/1525 (2009).