الدراسات الجينية البشرية البروتينات إصلاح الحمض النووي باستخدام خميرة كنظام النموذجي
Summary
يمكن استخدامها في الدراسات الوراثية الخميرة للتحقيق في وظائف الجزيئية والخلوية من الجينات البشرية في استقلاب الحمض النووي الخلوي. ووصف طرق للتوصيف الوراثية للإنسان<em> WRN</em> المنتج الجينات المعيبة في الشيخوخة المبكرة متلازمة فيرنر اضطراب في مسارات الحفظ وظيفيا باستخدام الخميرة كنظام نموذج لين العريكة.
Abstract
فهم دور كل من البروتينات البشرية إصلاح الحمض النووي الوراثي في مسارات تشكل تحديا هائلا لكثير من الباحثين. واقتصرت الدراسات الوراثية في نظم الثدييات بسبب عدم وجود الوسائل المتاحة بما في ذلك تعريف بسهولة متحولة خطوط الخلايا الوراثية ، والنظم التنظيمية التعبير ، وعلامات اختيار المناسب. للتحايل على هذه الصعوبات ، أصبحت أنظمة النموذج الجيني في حقيقيات النواة أقل خيارا جذابا لدراسة الحفظ وظيفيا البروتينات إصلاح الحمض النووي والممرات. قمنا بتطوير نظام الخميرة نموذج لدراسة وظائف محددة بشكل واضح الجينية لمتلازمة ويرنر helicase – nuclease (<em> WRN</em>) في استقلاب حمض النووي. ويمكن التحقيق في الظواهر المرتبطة الخلوية خلفيات وراثية محددة متحولة إلى توضيح مهام الخلوية والجزيئية<em> WRN</em> من خلال الأنشطة والتفاعلات الحفاز البروتين. الإنسان<em> WRN</emيمكن> الجين والمتغيرات المرتبطة بها ، في استنساخ الحمض النووي للتعبير البلازميدات في الخميرة ، تحت سيطرة عنصر البلازميد التنظيمية. ثم يمكن بناء التعبير أن تتحول إلى الخلفية المناسبة الخميرة متحولة ، وظيفة وراثية يعاير جانب مجموعة متنوعة من المنهجيات. باستخدام هذا النهج ، توصلنا إلى أن<em> WRN</em> ، مثل RecQ المرتبطة بها أفراد الأسرة وSgs1 بلم ، وتعمل في مسار Top3 التي تعتمد على أن من المحتمل أن تكون مهمة لتحقيق الاستقرار الجيني. يوصف هذا المنشور لدينا في الآونة الأخيرة [1] في<a href="http://www.impactaging.com"> www.impactaging.com</a>. وتقدم أساليب تفصيلية محددة المقايسات للدراسات الجينية في تكامل الخميرة في هذه الورقة.
Protocol
Discussion
واحدة من نقاط القوة لاستخدام خميرة كنظام النموذج هو توافر المسوخ في تكرار الحمض النووي وتحديد المسارات التي يتم حفظها إصلاح بين الخميرة والبشر. اختيار المزيد من transformants إيواء جينات معينة سهلة وموثوقة مثل سلالات المختبرية المسوخ عونية التغذي وناقلات مع علامات عونية …
Acknowledgements
وأيد هذا العمل بشكل كامل من قبل برنامج بحوث جماعية للمعهد الوطني المعاهد الوطنية للصحة ، للشيخوخة. نشكر الدكتور رودني Rothstein (جامعة كولومبيا) لسلالات الخميرة والدكتور براد جونسون (جامعة بنسلفانيا في كلية الطب ، فيلادلفيا ، بنسلفانيا) للتعبير عن SGS1 البلازميد.
Riferimenti
- Aggarwal, M., Brosh, R. M. WRN helicase defective in the premature aging disorder Werner Syndrome genetically interacts with Topoisomerase 3 and restores the top3 slow growth phenotype of sgs1 top3. Aging. 1, 219-233 (2009).
- Gangloff, S., McDonald, J. P., Bendixen, C., Arthur, L., Rothstein, R. The yeast type I topoisomerase Top3 interacts with Sgs1, a DNA helicase homolog: a potential eukaryotic reverse gyrase. Mol Cell Biol. 14, 8391-8398 (1994).
- Shor, E., Gangloff, S., Wagner, M., Weinstein, J., Price, G., Rothstein, R. Mutations in homologous recombination genes rescue top3 slow growth in Saccharomyces cerevisiae. Genetica. 162, 647-662 (2002).
- Sharma, S., Sommers, J. A., Brosh, R. M. In vivo function of the conserved non-catalytic domain of Werner syndrome helicase in DNA replication. Hum Mol Genet. 13, 2247-2261 (2004).
- Gietz, R. D., Schiestl, R. H., Willems, A. R., Woods, R. A. Studies on the transformation of intact yeast cells by the LiAc/SS-DNA/PEG procedure. Yeast. 11, 355-360 (1995).
- von Kobbe, C., Thoma, N. H., Czyzewski, B. K., Pavletich, N. P., Bohr, V. A. Werner syndrome protein contains three structure specific DNA binding domains. J Biol Chem. 278, 52997-53006 (2003).
