खमीर में आनुवंशिक अध्ययन सेलुलर डीएनए के चयापचय में मानव जीन की आणविक और सेलुलर कार्यों की जांच करने के लिए नियोजित किया जा सकता है. तरीके मानव के आनुवंशिक लक्षण वर्णन के लिए में वर्णित हैं<em> WRN</em> जीन कार्यात्मक संरक्षित रास्ते में एक विनयशील मॉडल प्रणाली के रूप में खमीर का उपयोग कर समय से पहले उम्र बढ़ने विकार वर्नर सिंड्रोम में दोषपूर्ण उत्पाद.
Abstract
आनुवंशिक रास्ते में मानव डीएनए की मरम्मत प्रोटीन की भूमिका को समझना कई शोधकर्ताओं के लिए एक दुर्जेय चुनौती है. स्तनधारी प्रणाली में आनुवंशिक अध्ययन उत्परिवर्ती आनुवंशिक सेल परिभाषित लाइनों, विनियामक अभिव्यक्ति प्रणाली, और उचित चयन मार्करों सहित आसानी से उपलब्ध उपकरणों की कमी के कारण सीमित किया गया है. इन कठिनाइयों को दरकिनार करने के लिए, कम eukaryotes में मॉडल आनुवंशिक सिस्टम कार्यात्मक संरक्षित डीएनए की मरम्मत प्रोटीन और रास्ते के अध्ययन के लिए एक आकर्षक विकल्प बन गए हैं. हम एक मॉडल खमीर वर्नर सिंड्रोम helicase – nuclease के खराब परिभाषित आनुवंशिक कार्यों का अध्ययन प्रणाली विकसित की है (<em> WRN</em>) न्यूक्लिक एसिड चयापचय में. सेलुलर परिभाषित आनुवंशिक उत्परिवर्ती पृष्ठभूमि के साथ जुड़े phenotypes के सेलुलर और आणविक कार्यों को स्पष्ट करने के लिए जांच की जा सकता है<em> WRN</em> इसके उत्प्रेरक की गतिविधियों और प्रोटीन बातचीत के माध्यम से. मानवीय<em> WRN</em> जीन और जुड़े वेरिएंट, खमीर में अभिव्यक्ति के लिए डीएनए plasmids में क्लोन, एक नियामक प्लाज्मिड तत्व के नियंत्रण के तहत रखा जा सकता है. अभिव्यक्ति का निर्माण तो उचित खमीर उत्परिवर्ती पृष्ठभूमि, और आनुवंशिक समारोह के तरीके की एक किस्म के द्वारा assayed में तब्दील किया जा सकता है. इस दृष्टिकोण का उपयोग करना, हम है कि निर्धारित<em> WRN</em> उसके संबंधित RecQ परिवार के सदस्यों BLM और Sgs1 की तरह, एक मार्ग TOP3 पर निर्भर है कि जीनोमिक स्थिरता के लिए महत्वपूर्ण होने की संभावना है में संचालित है. यह हमारे हाल [1] पर प्रकाशन में वर्णित है<a href="http://www.impactaging.com"> Www.impactaging.com</a>. खमीर में आनुवंशिक complementation अध्ययन के लिए विशिष्ट assays के विस्तृत तरीकों इस अखबार में प्रदान की जाती हैं.
Protocol
1. खमीर उपभेदों जंगली प्रकार SGS1 TOP3 के साथ खींच (WT, W303-1A, जीनोटाइप, मेट ade2 एक canl-100 his3 11 – 15 leu2-3, 112 trpl – एल ura3-1) [2], एक sgs1 उत्परिवर्ती (W1292- 3C ; जीनोटाइप मेट एक SUP4 – ओ:: URA3 sgs1-25 can1-100 his3 11-ade2-1, 15 leu2 3-, 112 trp1 – एक rad5 5…
Discussion
एक मॉडल प्रणाली के रूप में खमीर का उपयोग कर की ताकत के एक परिभाषित डीएनए प्रतिकृति और मरम्मत कि खमीर और मनुष्यों के बीच में संरक्षित कर रहे हैं रास्ते में म्यूटेंट की उपलब्धता है. विशिष्ट जीन शरण transformants क…
Acknowledgements
इस काम में पूर्ण NIH उम्र बढ़ने पर, राष्ट्रीय संस्थान के अंदर का रिसर्च प्रोग्राम द्वारा समर्थित किया गया था. हम खमीर SGS1 प्लाज्मिड अभिव्यक्ति के लिए और दबाव डा. ब्राड जॉनसन (चिकित्सा पेंसिल्वेनिया स्कूल विश्वविद्यालय, फिलाडेल्फिया, पेनसिल्वेनिया) के लिए डॉ. रॉडने रोथस्टीन (कोलंबिया विश्वविद्यालय) धन्यवाद.
Aggarwal, M., Brosh Jr., R. M. Genetic Studies of Human DNA Repair Proteins Using Yeast as a Model System . J. Vis. Exp. (37), e1639, doi:10.3791/1639 (2010).