La cascade adhésion des plaquettes a lieu en présence du cisaillement, un facteur non pris en compte dans conventionnelle (statique) du bien-plaque de tests. Cet article rend compte d'un test d'agrégation plaquettaire en utilisant une plaque de microfluidique bien le format d'émuler les conditions physiologiques de flux de cisaillement.
L'agrégation plaquettaire survient en réponse à une lésion vasculaire, où la matrice extracellulaire-dessous de l'endothélium a été exposé. La cascade adhésion des plaquettes a lieu en présence du cisaillement, un facteur non pris en compte dans conventionnelle (statique) du bien-plaque de tests. Cet article rend compte d'un test d'agrégation plaquettaire en utilisant une plaque de microfluidique bien le format d'émuler les conditions physiologiques de flux de cisaillement. Protéines extracellulaires, collagène de type I ou de facteur von Willebrand sont déposés dans le canal microfluidique en utilisant une perfusion active avec une pompe pneumatique. Les protéines de la matrice sont ensuite lavées avec du tampon et bloqué pour préparer le canal microfluidique pour les interactions plaquettes. Le sang entier marqués par un colorant fluorescent est perfusé par la voie à des débits différents afin de parvenir à l'activation des plaquettes et l'agrégation. Les inhibiteurs de l'agrégation plaquettaire peut être ajoutée avant l'expérience de cellule de flux de données pour générer des CI50 dose-réponse.
Bien que les méthodes ont été présentées ici, en utilisant une protéine de la matrice extracellulaire et spécifiques d'un inhibiteur spécifique de l'agrégation plaquettaire, le protocole est extensible à d'autres revêtements, d'autres types cellulaires et d'autres inhibiteurs des tests d'adhésion cellulaire. Les ingrédients clé de la réussite de ces expériences sont l'évitement des bulles dans les canaux microfluidiques, la dilution correcte de tous les réactifs dans les diluants corrects, et les conditions d'incubation appropriés pour tous les réactifs.
The authors have nothing to disclose.
Material Name | Tipo | Company | Catalogue Number | Comment |
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collagen I, Bovine | Reagent | Invitrogen | A1064401 | other sources of collagen I can be used |
PBS plus Ca/Mg | Reagent | Invitrogen | 14040-117 | |
Bovine serum albumin (BSA) | Reagent | EMD | EM-2930 Bottom of Form | From VWR |
calcein AM | Reagent | Invitrogen | C1430 | Calcein AM from BD can also be used |
BioFlux 1000 System | Reagent | Fluxion Biosciences | Contact Company | |
BioFlux Plate | Reagent | Fluxion Biosciences | 900013 | |
antiGPIIb/IIIa | Reagent | Abcam | ab33407 | an alternative # is ab15021 |
ReoPro | Reagent | Eli Lilly | by Rx only |