מפל הידבקות טסיות מתקיים בנוכחות זרימה גזירה, גורם לא היוו ב קונבנציונאלי (סטטי) היטב הצלחת מבחני. מאמר זה מדווח על assay טסיות צבירה תוך שימוש בתבנית microfluidic צלחת היטב לחקות פיסיולוגי תנאי הזרימה גזירה.
צבירת טסיות דם מתרחשת בתגובה לפגיעה בכלי הדם שבו תאי מטריקס להלן האנדותל נחשף. מפל הידבקות טסיות מתקיים בנוכחות זרימה גזירה, גורם לא היוו ב קונבנציונאלי (סטטי) היטב הצלחת מבחני. מאמר זה מדווח על assay טסיות צבירה תוך שימוש בתבנית microfluidic צלחת היטב לחקות פיסיולוגי תנאי הזרימה גזירה. חלבונים תאיים, קולגן אני או גורם פון Willebrand מופקדים בתוך הערוץ microfluidic באמצעות זלוף פעיל עם משאבה פנאומטי. חלבונים מטריצה נשטפים אז עם חיץ וחסמו להכין את הערוץ microfluidic עבור אינטראקציות הטסיות. דם שלם שכותרתו עם צבע פלואורסצנטי הוא perfused דרך ערוץ ברמות ספיקה שונים על מנת להשיג ההפעלה אגרגציה של טסיות דם. צבירה של מעכבי טסיות ניתן להוסיף לפני הניסוי תזרים התא לייצר IC50 בתגובה לנתונים מנה.
בעוד שיטות כאן הוצגו באמצעות חלבון מסוים תאי מטריקס ו מעכב ספציפי של אגרגציה של טסיות דם, הפרוטוקול הוא להרחבה ציפויים אחרים, סוגי תאים אחרים מעכבי אחרים עבור מבחני הידבקות התא. המרכיבים המפתח להצלחה של ניסויים כאלה הימנעות בועות ערוצי microfluidic, דילול נכון של כל ריאגנטים ב diluents נכונה, תנאי הדגירה מתאים ריאגנטים בכלל.
The authors have nothing to disclose.
Material Name | Tipo | Company | Catalogue Number | Comment |
---|---|---|---|---|
collagen I, Bovine | Reagent | Invitrogen | A1064401 | other sources of collagen I can be used |
PBS plus Ca/Mg | Reagent | Invitrogen | 14040-117 | |
Bovine serum albumin (BSA) | Reagent | EMD | EM-2930 Bottom of Form | From VWR |
calcein AM | Reagent | Invitrogen | C1430 | Calcein AM from BD can also be used |
BioFlux 1000 System | Reagent | Fluxion Biosciences | Contact Company | |
BioFlux Plate | Reagent | Fluxion Biosciences | 900013 | |
antiGPIIb/IIIa | Reagent | Abcam | ab33407 | an alternative # is ab15021 |
ReoPro | Reagent | Eli Lilly | by Rx only |