La cascata l'adesione delle piastrine avviene in presenza di flusso di taglio, non un fattore contabilizzati nel convenzionali (statici) ben piastra saggi. Questo articolo riporta una aggregazione delle piastrine-test utilizzando un microfluidica ben piastra formato di emulare fisiologiche condizioni di flusso di taglio.
L'aggregazione piastrinica si verifica in risposta al danno vascolare, dove la matrice extracellulare sotto l'endotelio è stato esposto. La cascata l'adesione delle piastrine avviene in presenza di flusso di taglio, non un fattore contabilizzati nel convenzionali (statici) ben piastra saggi. Questo articolo riporta una aggregazione delle piastrine-test utilizzando un microfluidica ben piastra formato di emulare fisiologiche condizioni di flusso di taglio. Proteine extracellulari, collagene I e fattore di von Willebrand sono depositate all'interno del canale microfluidico con perfusione attivo con una pompa pneumatica. Le proteine della matrice vengono poi lavate con tampone e bloccato per preparare il canale microfluidica per le interazioni delle piastrine. Di sangue intero marcato con colorante fluorescente è perfuso attraverso il canale a portate diverse al fine di ottenere l'attivazione piastrinica e aggregazione. Gli inibitori dell'aggregazione piastrinica può essere aggiunta prima dell'esperimento cella di flusso per generare IC50 dati dose-risposta.
Mentre i metodi qui sono stati presentati con una specifica proteina della matrice extracellulare e di uno specifico inibitore dell'aggregazione piastrinica, il protocollo è estensibile ad altri rivestimenti, altri tipi di cellule e altri inibitori per saggi di adesione cellulare. Gli ingredienti chiave del successo di tali esperimenti siano evitare bolle nei canali microfluidica, la diluizione corretta di tutti i reagenti nei diluenti corretta e condizioni di incubazione appropriate per tutti i reagenti.
The authors have nothing to disclose.
Material Name | Tipo | Company | Catalogue Number | Comment |
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collagen I, Bovine | Reagent | Invitrogen | A1064401 | other sources of collagen I can be used |
PBS plus Ca/Mg | Reagent | Invitrogen | 14040-117 | |
Bovine serum albumin (BSA) | Reagent | EMD | EM-2930 Bottom of Form | From VWR |
calcein AM | Reagent | Invitrogen | C1430 | Calcein AM from BD can also be used |
BioFlux 1000 System | Reagent | Fluxion Biosciences | Contact Company | |
BioFlux Plate | Reagent | Fluxion Biosciences | 900013 | |
antiGPIIb/IIIa | Reagent | Abcam | ab33407 | an alternative # is ab15021 |
ReoPro | Reagent | Eli Lilly | by Rx only |