血小板接着カスケードには、せん断流の存在下で、従来の(静的)ウェルプレートアッセイでは考慮されていない要因を行われます。この記事の生理的せん断流れの条件をエミュレートするマイクロ流体ウェルプレートフォーマットを利用した血小板凝集アッセイに関するレポート。
血小板凝集、内皮下細胞外マトリックスが露出された血管損傷への応答として発生します。血小板接着カスケードには、せん断流の存在下で、従来の(静的)ウェルプレートアッセイでは考慮されていない要因を行われます。この記事の生理的せん断流れの条件をエミュレートするマイクロ流体ウェルプレートフォーマットを利用した血小板凝集アッセイに関するレポート。細胞外タンパク質、コラーゲンI、またはvon Willebrand因子は、空気ポンプでアクティブな灌流を用いたマイクロ流体チャネル内に堆積される。マトリックスタンパク質を緩衝液で洗浄し、血小板の相互作用のためのマイクロ流体チャネルを準備するためにブロックされます。蛍光色素で標識された全血は、血小板活性化および凝集を達成するために様々な流量でチャネルを介して灌流される。血小板凝集の阻害はIC50用量応答データを生成するためのフローセル実験に先立って追加することができます。
ここでメソッドが特定の細胞外マトリックスタンパク質と血小板凝集の特異的阻害剤を用いて提示された一方で、プロトコルは他のコーティング、他の細胞型と細胞接着アッセイのための他の阻害剤への拡張が可能です。このような実験の成功するための秘訣は、すべての試薬のためのマイクロ流体チャネル、正しい希釈剤内のすべての試薬の適切な希釈、および適切な培養条件における気泡の回避です。
The authors have nothing to disclose.
Material Name | Tipo | Company | Catalogue Number | Comment |
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collagen I, Bovine | Reagent | Invitrogen | A1064401 | other sources of collagen I can be used |
PBS plus Ca/Mg | Reagent | Invitrogen | 14040-117 | |
Bovine serum albumin (BSA) | Reagent | EMD | EM-2930 Bottom of Form | From VWR |
calcein AM | Reagent | Invitrogen | C1430 | Calcein AM from BD can also be used |
BioFlux 1000 System | Reagent | Fluxion Biosciences | Contact Company | |
BioFlux Plate | Reagent | Fluxion Biosciences | 900013 | |
antiGPIIb/IIIa | Reagent | Abcam | ab33407 | an alternative # is ab15021 |
ReoPro | Reagent | Eli Lilly | by Rx only |