Den trombocyter vidhäftning kaskaden sker i närvaro av skjuvning flöde, svarade en faktor inte i konventionella (statisk) väl platta analyser. Denna artikel rapporterar om en trombocyt-aggregation analysen använder en mikroflödessystem väl platta format för att efterlikna fysiologiska klippa flöde.
Trombocytaggregation svar på vaskulär skada där den extracellulära matrisen under endotelet har utsatts. Den trombocyter vidhäftning kaskaden sker i närvaro av skjuvning flöde, svarade en faktor inte i konventionella (statisk) väl platta analyser. Denna artikel rapporterar om en trombocyt-aggregation analysen använder en mikroflödessystem väl platta format för att efterlikna fysiologiska klippa flöde. Extracellulära proteiner, kollagen I och von Willebrands faktor deponeras inom mikroflödessystem kanal med aktiv perfusion med en pneumatisk pump. Matrisen proteiner sedan tvättas med buffert och blockerade för att förbereda mikroflödessystem kanal för trombocyt interaktion. Helblod märkta med fluorescerande färg är perfusion genom kanalen vid olika flöden i syfte att uppnå trombocytaktivering och aggregation. Hämmare av trombocytaggregation kan läggas före flödescellen försöket att generera IC50 uppgifter dos-respons.
Medan de metoder som här presenterades med en specifik extracellulärt matrix protein och en specifik hämmare av trombocytaggregation, men protokollet utdragbar till andra ytbeläggningar, andra celltyper och andra hämmare för analyser celladhesion. De viktigaste ingredienserna till framgång av dessa experiment kan undvika bubblor i mikroflödessystem kanaler, korrekt utspädning av alla reagenser i rätt spädningsvätskor, och lämpliga villkor inkubationstiden för alla reagenser.
The authors have nothing to disclose.
Material Name | Tipo | Company | Catalogue Number | Comment |
---|---|---|---|---|
collagen I, Bovine | Reagent | Invitrogen | A1064401 | other sources of collagen I can be used |
PBS plus Ca/Mg | Reagent | Invitrogen | 14040-117 | |
Bovine serum albumin (BSA) | Reagent | EMD | EM-2930 Bottom of Form | From VWR |
calcein AM | Reagent | Invitrogen | C1430 | Calcein AM from BD can also be used |
BioFlux 1000 System | Reagent | Fluxion Biosciences | Contact Company | |
BioFlux Plate | Reagent | Fluxion Biosciences | 900013 | |
antiGPIIb/IIIa | Reagent | Abcam | ab33407 | an alternative # is ab15021 |
ReoPro | Reagent | Eli Lilly | by Rx only |