Modélisation colite murin en utilisant du sulfate de sodium Dextran (DSS)
Summary
Dextran sulfate de sodium (DSS) administré dans l'eau potable est un modèle murin établie blessures inflammatoires de colite aiguë. Ce protocole décrit la méthode pour le traitement de DSS et la préparation des tissus.
Abstract
Colite peuvent survenir des infections virales ou bactériennes, ischémique ou de troubles auto-immunes; colite ulcéreuse et plus particulièrement la variante du côlon de la maladie de Crohn – maladie de Crohn. La colite aiguë peuvent présenter des douleurs abdominales et une distension, une malabsorption, diarrhée, rectorragies et de mucus dans les selles. Nous commençons à comprendre les interactions complexes entre l'environnement, la génétique et le dysfonctionnement de la barrière épithéliale inflammatoire modèles de maladies animales et l'intestin de colite ont été essentielles pour faire progresser notre compréhension de cette maladie. Un modèle populaire implique complétant l'eau potable des souris du sulfate de sodium à faible poids moléculaire Dextran (DSS), entraînant des dommages épithéliaux et une réponse robuste inflammatoires dans le côlon de plusieurs jours<sup> 1</sup>. Variantes de cette approche peut être utilisée pour modéliser une blessure aiguë, une blessure aiguë suivie de réparation, et des cycles répétés de DSS entrecoupées de récupération de modélisation des maladies inflammatoires chroniques<sup> 2</sup>. Après un seul traitement de quatre jours de DSS 3% dans l'eau potable, les souris montrent des signes de colite aiguë, y compris la perte de poids, selles sanglantes, et la diarrhée. Les souris sont euthanasiés à la fin de la cure et à deux points autopsie disséqués sont traitées et peuvent être «Swiss laminé"<sup> 3</sup> Pour permettre une analyse microscopique de la totalité du côlon ou infusée avec du formol comme «saucisses» pour permettre une analyse macroscopique. Tissu est ensuite inclus dans la paraffine, sectionnées et colorées pour examen histologique.
Protocol
Discussion
Ce protocole peut être modifié pour modèle de lésion aiguë, blessure-réparation, ou chronique du côlon processus blessures.
Modification des traumatismes aigus:
Lib DSS ad traitement pendant 4-6 jours, suivie par le sacrifice immédiat
Blessure-Réparation de modification:
Blessure avec 4-6 jours de traitement DSS suivie par la période de récupération de 3-4 jours et le sacrifice (comme décrit dans le…
Divulgazioni
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Le financement accordé par le NIH (1 K08 DK080221-01) et les fonds de développement institutionnel Vanderbilt.
Materials
| Material Name | Tipo | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| Dextran Sulfate Sodium Salt | USB Corp | 9011-18-1 | mol wt 40,000-50,000 | |
| 10% Buffered Formalin Phosphate | Fisher Scientific | SF100-4 | ||
| Isoflurane, USP | Phoenix Pharmaceuticals | NDC 57319-474-06 | ||
| TISSUE PATH Macrosette Cassettes | Fisher Healthcare | 15182706 | ||
| BD 10 ml Syringe | B-D | 309604 | ||
| Ethyl Alcohol | Pharmco-Aaper | E190 | Dilute to 70% with distilled water | |
| 20G Straight Feeding Needle | VWR | 20068-612 | ||
| 27G1/2 PrecisionGlide Needle | B-D | 305109 | ||
| Dissecting Scissors Sharp/Blunt Tip | VWR | 82027-588 | ||
| Waugh Forceps | VWR | 82027-428 | ||
| Non-absorbable Suture | LOOK Surgical Specialties | SP116 | ||
| Whatman Blotting Paper | VWR | 28298-020 | Cut as needed | |
| Nalgene Surfactant-Free Cellulose Acetate (SFCA) Filter | Cole-Parmer | EW-06731-2 | ||
| Carbon fiber composites digital caliper | Fisher Scientific | 15-007-958 |
Riferimenti
- Okayasu, I. A novel method in the induction of reliable experimental acute and chronic ulcerative colitis in mice. Gastroenterology. 98 (3), 694-702 (1990).
- Martinez, J. A. Deletion of Mtgr1 sensitizes the colonic epithelium to dextran sodium sulfate-induced colitis. Gastroenterology. 131 (2), 579-588 (2006).
- Moolenbeek, C., Ruitenberg, E. J. The “Swiss roll”: a simple technique for histological studies of the rodent intestine. Lab Anim. 15 (1), 57-59 (1981).
- Mahler, M. Differential susceptibility of inbred mouse strains to dextran sulfate sodium-induced colitis. Am J Physiol. 274, G544-551 (1998).
- Aharoni, R. Immunomodulatory therapeutic effect of glatiramer acetate on several murine models of inflammatory bowel disease. J Pharmacol Exp Ther. 318 (1), 68-78 (2006).
- Hahm, K. B. Loss of transforming growth factor beta signalling in the intestine contributes to tissue injury in inflammatory bowel disease. Gut. 49 (2), 190-198 (2001).
- Green, B. T. Adrenergic modulation of Escherichia coli O157:H7 adherence to the colonic mucosa. Am J Physiol Gastrointest Liver Physiol. 287 (6), G1238-1246 (2004).
- Dieleman, L. A. Chronic experimental colitis induced by dextran sulphate sodium (DSS) is characterized by Th1 and Th2 cytokines. Clin Exp Immunol. 114 (3), 385-391 (1998).
