有核細胞を循環の濃縮のための自動化されたマイクロ流体血液溶解プロトコル
Summary
自動化されたマイクロ流体デバイスは、セルの損失なしで高品質のサンプルの分離を確実に溶血を経由して末梢血からの有核細胞の濃縮を循環させるために開発されました。
Abstract
この報告書では自動化されたマイクロ流体血液溶解装置用プロトコルが詳しく説明されています。白血球と内皮細胞を含む有核細胞（のCNC）、循環、個々の免疫状態に関する更新状況のための理想的なプラットフォームを提供します。マイクロ流体のプロトコルは、選択的な細胞の損失と、ユーザーが介在するステップによる試料調製の変動なしでCNCの濃縮が可能になります。簡単に言えば、プロトコルは、デバイス作製、サンプルの収集、デバイスのセットアップ、およびマイクロ流体チャンバーを介して血液を実行しているが含まれています。デバイス内で全血は急速に50ミクロン× 150ミクロンマイクロ流体チャネル内の約10秒間、脱イオン水と混合される。この時点ではスパンの赤血球は低張条件により可溶化されています。チャネルの底部のヘリンボーン構造が完全に混合し、一定の環境への細胞の露出を確認してください。残りの細胞は、装置の出口で等張条件に戻さ2％のパラホルムアルデヒドを用いて固定し、CNCのから赤血球残骸を分離する遠心分離し、フローサイトメトリーによる染色と分析のために流れの緩衝液に懸濁している。結果は保存されているCNC人口クリーンフローサイトメトリーの散布図を示す。このデバイスとプロトコルの重要性は、CNCの個体群の解析による疾患の病因の研究と理解に来る。したがって、自動化、有効性、およびマイクロ流体プロトコルのシンプルさが実証されています。
Protocol
Discussion
自動化されたマイクロ流体血液溶解プロトコルが報告されている。プロトコルの中で注目に値する重要な手順は次のとおりです。セクションP.2.1で、それはサンプルが外れ成熟した内皮細胞が含まれている偽陽性として機能するように収集された最初の血液バイアルを廃棄することが重要です。また、コレクションの1時間以内に血液サンプルを実行することを確認してください。プライミン?…
Acknowledgements
研究は、トランスレーショナルリサーチのウォレス時間コールター財団早いキャリア賞によってサポートされています。血液サンプルの収集とヘルプのためのティムアンドリュース、小児血液/腫瘍学、のおかげ。また博士はサムヴェルハウゼン、フローサイトメトリーコア、フローサイトメトリーのサンプルを実行するとヘルプのためのジェームズグラハムブラウンがんセンター、おかげで。
Riferimenti
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- Sethu, P. Continuous Flow Microfluidic Device for Rapid Erythrocyte Lysis. Anal. Chem. 76 (21), 6247-6253 (2004).
