Автоматизированная микрожидкостных протокол Лизис кровь для обогащения Циркуляционные ядерных клеток
Summary
Автоматизированные микрожидкостных Прибор был разработан для циркуляции зарождаются обогащения клетка из периферической крови через лизис эритроцитов, что обеспечивает изоляцию высокого качества образцов без потерю клеток.
Abstract
В этом докладе протокол для автоматизированного микрожидкостных устройств лизиса крови подробно. Циркуляционные ядерных клеток (ЧПУ), в том числе лейкоцитов и эндотелиальных клеток, обеспечивают идеальную платформу для обновления статуса на иммунную состояние человека. Микрожидкостных протокол позволяет для обогащения ЧПУ без селективной потери клеток и подготовки проб изменчивости в связи с пользователем опосредованного действия. Короче говоря, протокол включает устройство изготовление, пробы, устройство установки и запуска крови через микрожидкостных камеры. В устройстве цельной крови быстро смешать с деионизированной водой в течение примерно 10 секунд в 50 мкм х 150 микрон микрожидкостных каналов. В этом промежуток времени эритроциты лизируются вследствие гипотонического условиях. Елочка структур на дно канала обеспечить тщательное перемешивание и экспозиция клеток к постоянной среды. Оставшиеся клетки возвращаются в изотоническом условия на выходе из устройства, фиксируется с помощью 2% параформальдегида, центрифугируют для отдельных эритроцитов мусор с ЧПУ, а также взвешенные в потоке буфера для окрашивания и анализ с помощью проточной цитометрии. Результаты показывают, чистой проточной цитометрии разброс участков с населением ЧПУ сохранены. Значение этого устройства и вступления протокола в изучении и понимании патогенеза заболевания путем анализа населения с ЧПУ. Таким образом, автоматизация, эффективность и простота микрожидкостных протокола продемонстрирована.
Protocol
Discussion
Автоматизированные микрожидкостных протокол лизиса крови не поступало. В рамках протокола критических шагов стоит упомянуть. В разделе п.2.1, важно, чтобы отменить первый флакон крови, взятой в качестве образца содержит выбили зрелые эндотелиальные клетки, выступая в качестве ложных с?…
Acknowledgements
Исследования были поддержаны Уоллес H. Coulter Фонд Рано премии Карьера в трансляционных исследований. Благодаря Тиму Эндрюс, детской гематологии / онкологии, за помощь сбора крови образца. Кроме того, благодаря д-р Сэм Wellhausen, Core проточной цитометрии, Джеймс Грэм Браун онкологического центра, за помощь в работе образцы проточной цитометрии.
Riferimenti
- White, W. Clinical application of microfluidic leukocyte enrichment protocol in mild phenotype sickle cell disease (SCD. Biomedical Microdevices. 11 (2), 477-483 (2009).
- Sethu, P. Continuous Flow Microfluidic Device for Rapid Erythrocyte Lysis. Anal. Chem. 76 (21), 6247-6253 (2004).
