Mostreremo come registrare le risposte flash da coni del mouse utilizzando un elettrodo di aspirazione.
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Articolo metodologico
Unicellulari registrazioni di aspirazione da Fotorecettori Cone mouse
In questo articolo
Sommario
Abstract
Bastoncelli e coni della retina sono responsabili per la rilevazione della luce. Nel buio, nucleotidi ciclici-dipendenti (CNG) canali nel segmento esterno sono aperte e permettono il flusso di cationi costantemente verso l'interno attraverso la membrana, la cellula depolarizzanti. Esposizione alla luce provoca la chiusura dei canali CNG, blocca il flusso di corrente verso l'interno zione e, quindi, si traduce in iperpolarizzazione delle cellule. Sulla base della polarità di fotorecettori, un metodo di registrazione di aspirazione è stato sviluppato nel 1970 che, a differenza del classico patch-clamp, non necessita di penetrare la membrana plasmatica
Protocollo
Fare elettrodi
- Rendere gli elettrodi di registrazione con un estrattore micropipetta e lucidare gli elettrodi con filamento di riscaldamento sotto il microscopio. Per la registrazione cono di aspirazione del mouse singola cellula, il diametro interno sulla punta dell'elettrodo è di circa 6-7 micron.
- Preparare elettrodi di riferimento. Pesare 1% agar-agar in acqua distillata. Sciogliete la soluzione agar in bagno d'acqua calda. Riempire le pipette di vetro (L = 100 mm, OD / ID = 1/0.75 mm) con l'1% agar con siringa. Solidificare l'agar a temperatura ambiente per 10 minuti.
- Tagliare le pipette a metà con un coltello di dia....
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Discussione
Cella singola registrazione di aspirazione da fotorecettori è stato sviluppato 3 decenni fa. Essa ci permette di registrare trans-membrana variazione di corrente indotta dalla stimolazione luminosa senza penetrare la membrana cellulare. A causa della elevata adesione cellula-cellula, è difficile isolare sano singola asta e il cono di retina del mouse come retina anfibi ed è difficile trovare coni singoli a causa della bassa percentuale (3%) e piccole dimensioni. L'interno-in-segmento (IS-in) metodo di registrazione .......
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Ringraziamenti
Supportato da Career Development Award da ricerca per prevenire la cecità, NIH concedere EY 019312, e sovvenzione illimitata di ricerca per prevenire la cecità e EY 02687 (Department of Ophthalmology & Visual Sciences alla Washington University).
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Riferimenti
- Yau, K. W., Lamb, T. D., Baylor, D. A. Light-induced fluctuations in membrane current of single toad rod outer segments. Nature. 269, 78-80 (1977).
- Nikonov, S. S. Photoreceptors of Nrl -/- mice coexpress functional S- and M-cone....
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Ristampe e permessi
Tag
Registrazione tramite elettrodo a aspirazionedissezione della retinaregistrazione del segmento internorisposta foto-indotta dei fotorecettoriamplificatore patch clampconfigurazione dello stimolatore otticosistema di tampone per perfusionepreparazione della punta dell'elettrodopreparazione dell'elettrodo di riferimento
