Istologia ossea Undecalcified fornisce importanti informazioni per una varietà di applicazioni cliniche e di ricerca. E 'tecnicamente impegnativo, soprattutto con esemplari di grandi dimensioni. Questo video illustra il processo di produzione di sezioni di buona qualità e dimostra le difficoltà tecniche e le modalità con le quali per il loro superamento.
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Articolo metodologico
Bone Preparazione Undecalcified per Istologia, Istomorfometria e analisi Fluorocromo
In questo articolo
Sommario
Abstract
Istologia ossea Undecalcified dimostra la micro-architettura del tessuto osseo. Esso mostra sia le componenti mineralizzata e cellulare di osso, che fornisce informazioni vitali sul turnover osseo o la formazione dell'osso ed il riassorbimento. Ciò ha enorme importanza in una varietà di applicazioni cliniche e di ricerca. Si produce belle immagini 1 e consente di tecniche quali la valutazione fluorocromo e istomorfometria 2. Analisi fluorocromo è una tecnica in cui vengono iniettati coloranti fluorescenti che si legano al calcio in un punto particolare momento, che permette di quantificare la quantità di mineralizzazione in quel dato momento. Istomorfometria è un processo di quantificazione delle ossa a livello microscopico.
Esecuzione di istologia undecalcified osso è tecnicamente impegnativo, soprattutto con esemplari di grandi dimensioni. Si richiede variazioni nella tecnica da quelli utilizzati in paraffina di serie incorporato istologia. Questo video illustra il processo di produzione di sezioni di buona qualità e dimostra le difficoltà tecniche e le modalità con le quali per il loro superamento. Preparazione dei campioni, fissazione e la lavorazione si ottengono con un modo simile a quello di altri tessuti molli, tuttavia a causa della densità e bassa permeabilità di osso molto più tempo di fissazione e tempi di lavorazione sono necessari, spesso prendendo diverse settimane. Incorporare si ottiene utilizzando un mezzo di supporto con durezza simili o uguali e la densità fino all'osso come metacrilato, ma a differenza di infiltrazione di paraffina e l'inclusione, questo è un passo irreversibile. Sezionamento può essere ottenuto dalla macinazione che produce una sezione più spessa, che è ottimale per gli studi, come l'analisi fluorocromo. Questo è meglio realizzato utilizzando una lama di diamante su un macrotome. In alternativa, sezioni più sottili possono essere prodotti per la microscopia ottica e questo si ottiene utilizzando un microtomo slitta con una lama molto affilata. Il microtomo slitta fornisce la solidità e la stabilità necessaria per grandi blocchi duri. Resina sezioni incorporato può essere colorato con una varietà di macchie, di cui sia dimostrato.
Protocollo
- Il tessuto è inserito in un contenitore sigillato contenente il 10% tampone fosfato soluzione di formalina 3. Garantire la minima esposizione alla luce, se l'analisi fluorocromo deve essere eseguita, in quanto il fluorocromi sono fotosensibili.
- Stabilire che l'orientamento del tessuto sarà richiesto.
- Tagliare il campione a misura, con l'orientamento corretto, utilizzando una sega a nastro. Adottare misure di sicurezza sono rispettate. Il campione viene poi inserito in un contenitore opaco, il cui volume dovrebbe essere circa dieci volte la dimensione del campione per ottenere una fissazione adeguata. Il campione dovrebbe rimanere nella solu....
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Ringraziamenti
Gli autori desiderano ringraziare per l'aiuto della signora Sue Connell per la sua esperienza in embedding resina e la sig.ra Stefania Tombe per la sua esperienza di laboratorio. Gli autori desiderano ringraziare il professor Frank e il dottor Kandziora Marie-Anne Polboth per i loro consigli.
....Accesso limitato. Accedi o avvia una prova gratuita per visualizzare questo contenuto.
Materiali
Solventi:
(Reagenti da Grale scientifico)
- 10% Normale formalina tamponata, etanolo, xilene e butanolo acido
Tutti grado istologico, senza zolfo.
Grale scientifico Pty Ltd.
http://www.grale.com.au
- Staccarsi, stampi di plastica
Grale scientifico
- SuperFrost PLUS Microscopio diapositive
Lomb scientifico Pty Ltd.
http://www.lomb.com.au
- GlycolMethacrylate Technovit 7100
Heraeus Kulzer
http://www.kulzer-technik.de/168/Products/Histology/Technovit_7100.htm - Backup blocco di resina Technovit 3040 blocco Histo
Heraeus Kulzer
(Reagenti da Grale scientifico)
Goldner di colorazione tricromica
1. Weigert ferro hemotoxylin (DeGroat)
| a) Hemotoxylin soluzione | |
| Hemotoxylin | 1g |
| Alcol assoluto | 100 ml |
| b) Soluzione di ferro | |
| 30% acquosa di cloruro ferrico | 4 ml |
| Acido cloridrico (concentrato) | 1 ml |
| Acqua distillata | 95mL |
Filtrato e aggiunto al volume uguale di hemotoxylin immediatamente prima macchia utilizzato.
2. Ponceau-fucsina-azophloxin magazzino soluzioni
| a) Ponceau de xilidina soluzione | |
| Ponceau de xilidina | 0,75 g |
| acido fuchsion | 0,25 g |
| Acido acetico | 1 ml |
| mescolare e aggiungere acqua distillata (100ml) | |
| b) azophloxin soluzione | |
| Azophloxin | 0,5 g |
| L'acido acetico | 0,6 ml |
| mescolare e aggiungere acqua distillata (100ml) | |
| c) Finale di lavoro soluzione macchia | |
| Ponceau-fucsina soluzione | 5-10ml |
| Azophloxin | 2 ml |
| 0,2% soluzione di acido acetico | 88mL |
3. Soluzione luce verde
| Luce verde | 1g |
| acido acetico | 1 ml |
| Mescolare e aggiungere acqua distillata (500ml) | |
4. Phophomolybdic acido-Orange G soluzione
| Fosfomolibdico acido | 3g |
| Arancio G | 2g |
| Sciogliere in 500 ml di acqua distillata e aggiungere timolo cristallo. | |
Von Kossa Stain
| 1% di nitrato d'argento acquoso |
| Tiosolfato di sodio 2,5% |
| 1% safranina O |
Alcian macchia blu
| Alcian blu 8GX | 1g |
| 3% di soluzione di acido acetico | 100 ml |
Hemotoxylin e eosina
| a) Harris hemotoxylin | |
| Hemotoxylin | 2.5g |
| Alcol assoluto | 25mL |
| Allume di potassio | 50g |
| acqua distillata | 500mL |
| ossido di mercurio | 1.25g O |
| Iodato di sodio | 0,5 g |
| Acido acetico glaciale | 20 mL |
| b) Eosina soluzione | |
| Eosina prodotto commercialmente è stato utilizzato. | |
Tutte le polveri colorante macchia sono Gurr polveri coloranti.
Tutti i reagenti sono reattivi e non reattivi di laboratorio
Fluorocromi
Fabbricante | Fluorocromo | Numero di catalogo |
| Sigma-Aldrich, Sydney | Calceina verde | C0875 |
| Sigma-Aldrich, Sydney | Alizarina complessone | A3882 |
| Intervet Australia, Victoria | Ossitetraciclina (Fuori della droga scaffale antimicrobici) | Nome commerciale; Engemycin 100 |
Riferimenti
- Kerr, J. Atlas of Functional Histology. , Harcourt Publishing. Melbourne, Australia. 164-168 (2000).
- Parfitt, A. M. Bone histomorphometry: standardization of nomenclature, symbols, and units. Report of the ASBMR Histomorphometry Nomenclature Committee. J Bone Miner R....
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Ristampe e permessi
