Questa tecnica consente l'utilizzo di alta risoluzione magic angle spinning spettroscopia RM del protone (1H-MRS HRMAS) per la caratterizzazione molecolare di vivere Drosophila melanogaster Con un tradizionale 14,1 tesla spettrometro dotato di una sonda HRMAS.
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Articolo metodologico
Spettroscopia di Risonanza Magnetica dal vivo Drosophila melanogaster Utilizzando Magic Angle Spinning
In questo articolo
Sommario
Abstract
Ad alta risoluzione magico angolo Spinning (HRMAS) spettroscopia di risonanza magnetica protonica (
Protocollo
Parte 1: Preparazione della Drosophila per le misure HRMAS
- Utilizzando le normali procedure flylab 1, raccogliere nuovi eclosing vola per 3 giorni e trasferirli a volare flaconi contenenti prodotti alimentari freschi volare. Incubare le mosche raccolti per 5 giorni in modo che le mosche diventerà 5-8 giorni vecchio appena prima dell'esperimento. Solo sesso (in genere maschi) viene utilizzato per gli esperimenti.
- Uso sano, integro tipo selvatico vola da confrontare con trattati esempio traumatizzati o geneticamente modificati vola 1.
- Luogo vola sola in provette da 2 ml contenente un pezzo (~ 0,2 ml) di vola....
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Discussione
Con l'eccezione del recente rapporto della fattibilità di risonanza magnetica in vivo nei moscerini della frutta 6, studi in vivo MRS in Drosophila non sono ancora stati segnalati. Nel presente protocollo, si descrive l'implementazione di un romanzo in vivo HRMAS 1 H-MRS approccio per la rilevazione di molecole biologicamente importanti. In particolare, abbiamo rilevato lipidi e metaboliti piccoli vivono Drosophila vola al 14,1 T in circa 45 minu.......
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Dichiarazioni
Gli esperimenti sugli animali sono stati eseguiti in conformità con le linee guida e dei regolamenti previsti dal Massachusetts General Hospital di ricerca Comitato Istituzionale Animal Review Board.
Ringraziamenti
Questo lavoro è stato sostenuto in parte da una National Institutes of Health (NIH) a concedere AI063433 Laurence G. Rahme, una Istituti National Institute of Health (NIH) Centro Grant (P50GM021700) di Ronald Tompkins G. (A. Tzika Aria, Direttore del il nucleo NMR), e un Ospedale per i bambini Shriner assegno di ricerca (# 8893) ad A. Aria Tzika. Ringraziamo Dionyssios Mintzopoulos Ph.D. per l'assistenza nelle fasi iniziali di sviluppo di questo protocollo e Ovidiu C. Andronesi Ph.D. per l'assistenza con la sequenza di impulsi TOBSY.
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Materiali
| Nome | Azienda | Numero di catalogo | Commenti | |
|---|---|---|---|---|
| Ossido di deuterio | Reagente | Sigma-Aldrich | 7789-20-0 | |
| 3-(trimetilsilil)propionico-2,2,3,3-d4 acido | Reagente | Sigma-Aldrich | 24493-21-8 | |
| agar, saccarosio, lievito, farina di mais | Alimenti | Genesee Scientific | http://www.flystuff.com/ | |
| Moscerini Oregon RS o Canton-S | Linee di drosofile adulte | Centro di conservazione delle linee genetiche di Bloomington | http://flystocks.bio.indiana.edu/ | |
| Pennello | Attrezzatura | (dimensione 0) | ||
| tubi da 2 ml | Attrezzature | Fisher Scientific | K749521-1590 | |
| Incubatori per Drosophila | Attrezzatura | elevata capacità di umidità (60-75%), temperatura regolabile e ciclo luce:buio di 12 h:12 h. | ||
| Spettrometro NMR Bruker Bio-Spin Avance (600,13 MHz) con sonda tripla risonanza da 4 mm1H, 13C, 2H) Sonda HRMAS | Attrezzature | Bruker Corporation | ||
| Unità BTO-2000 in combinazione con un'unità pneumatica MAS | Attrezzature | Bruker Corporation | ||
| rotore in ossido di zirconio da 4 mm (capacità 50 µl) | Attrezzatura | Bruker Corporation | B3829 (negozio Bruker) | |
| MestReC (Mestrelab Research) | Software | Analisi degli spettri NMR monodimensionali http://mestrelab.com/ | ||
| SPARKY 3, USCF | Software | Analisi spettrale NMR 2D http://www.cgl.ucsf.edu/home/sparky/ |
Riferimenti
- Apidianakis, Y., Rahme, L. G. Drosophila melanogaster as a model host for studying Pseudomonas aeruginosa infection. Nat Protoc. 4, 1285-1294 (2009).
- Meiboom, S., Gill, D. Modified spin-echo method for measuring nuclear relaxation time. Rev Sci Instrum. <....
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Ristampe e permessi
