Получение гемоциты от Гавайских бобтейл Squid Euprymna scolopes И наблюдая за их соблюдение Симбиотические и ненасилия в симбиотических бактерий
Summary
Это видео будет показано, как получить гемоциты (клетки крови) из Гавайского бобтейл кальмары,<em> Euprymna scolopes</em> Для использования в клеточной биологические и бактериальные анализы адгезии. Гемоциты будет окрашенных флуоресцентным красителем и подвергаются GFP-меченых бактерий.
Abstract
Исследования о роли иммунной системы в посредничестве молекулярной сигнализации между полезными бактериями и их хозяева, в последние годы, внесли существенный вклад в наше понимание совместной эволюции эукариот с их микрофлоры. Симбиотические ассоциации между Гавайских бобтейл кальмары,<em> Euprymna scolopes</em> И биолюминесценции бактерий<em> Vibrio ПзсЬеп</em> Был использован в качестве модельной системы для понимания последствий полезных бактерий на животных развития. Недавние исследования показали, что макрофагами, как гемоциты, единственным клеточный компонент врожденной иммунной системой хозяина кальмара, вероятно, играют важную роль посредника в установлении и поддержании этого объединения. Этот протокол будет показано, как получить от гемоциты<em> Е. scolopes</em>, А затем использовать эти клетки в бактериальных обязательных анализов. Взрослые кальмары первый наркоз перед гемолимфы собирается с помощью шприца из основных головных кровеносных сосудов. Хост гемоциты, содержащиеся в извлеченной гемолимфы, привязаны к покровные стекла патрон, а затем подвергается зеленый флуоресцентный белок меченного симбиотических<em> Vibrio ПзсЬеп</em> И не симбиотических<em> Vibrio harveyi</em>. Гемоциты являются контрастно с флуоресцентным красителем (Cell Tracker Orange, Invitrogen), а затем визуализируется с помощью флуоресцентного микроскопа.
Protocol
Discussion
Исследования о роли иммунной системы в посредничестве молекулярной сигнализации между полезными бактериями и их хозяева, в последние годы, внесли существенный вклад в наше понимание совместной эволюции эукариот с их микрофлоры. Кальмар / вибриона система зарекомендовала себя как пос…
Acknowledgements
Источники финансирования: Университет штата Коннектикут Фонд исследований и Отдел молекулярной и клеточной биологии в SVN, Sigma Xi Грант-в-помощь-исследований и Антонио Х. и Р. Majorie
Романо последипломного образования стипендия в АЕК
Materials
| Material Name | Tipo | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| Lab-Tek chambered #1.0 borosilicate coverglass system (8-chambers) | Thermo-Fisher Scientific | 155411 | ||
| 26.5 G 1ml latex-free insulin syringe | Becton, Dickinson and Company | C34551 | ||
| Cell Tracker Orange | Invitrogen | C34551 | ||
| SteREO Discovery V20 Microscope | Zeiss | |||
| SP2 Confocal Microscope | Leica |
Riferimenti
- Koropatnick, T. A., Kimbell, J. R., McFall-Ngai, M. J. Responses of host hemocytes during the initiation of the squid-Vibrio symbiosis. Biol. Bull. 212, 29-39 (2007).
- McFall-Ngai, M. J. Unseen forces: the influence of bacteria on animal development. Dev. Biol. 242, 1-14 (2002).
- McFall-Ngai, M. J., Ruby, E. G. Symbiont recognition and subsequent morphogenesis as early events in an animal-bacterial mutualism. Science. 254, 1491-1494 (1991).
- Nyholm, S. V., Stewart, J. J., Ruby, E. G., McFall-Ngai, M. J. Recognition between symbiotic Vibrio fischeri and the haemocytes of Euprymna scolopes. Environ. Microbiol. 11, 483-493 (2009).
- Nyholm, S. V., McFall-Ngai, M. J. The winnowing: establishing the squid-Vibrio symbiosis. Nat. Rev. Microbiol. 2, 632-642 (2004).
- Nyholm, S. V., Stabb, E. V., Ruby, E. G., McFall-Ngai, M. J. Establishment of an animal-bacterial association: recruiting symbiotic Vibrios from the environment. Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 97, 10231-10235 (2000).
- Nyholm, S. V., McFall-Ngai, M. J. Sampling the light-organ microenvironment of Euprymna scolopes: description of a population of host cells in association with the bacterial symbiont Vibrio fischeri. Biol Bull. 195, 89-97 (1998).
- Visick, K. L., Ruby, E. G. Vibrio fischeri and its host: it takes two to tango. Curr. Opin. Microbiol. 9, 632-638 (2006).
