Obtention hémocytes de l'Hawaiian Bobtail Squid Scolopes Euprymna Et en observant leur adhésion aux bactéries symbiotiques et non symbiotiques
Summary
Cette vidéo vous montrera comment obtenir des hémocytes (cellules sanguines) de l'Hawaiian calmars bobtail,<em> Scolopes Euprymna</em> Pour une utilisation dans des dosages biologiques et d'adhésion cellulaire bactérienne. Hémocytes seront colorées avec un colorant fluorescent et exposés à la GFP-étiquetée bactéries.
Abstract
Les études concernant le rôle du système immunitaire dans la médiation de la signalisation moléculaire entre les bactéries bénéfiques et leurs hôtes ont, ces dernières années, apporté une contribution significative à notre compréhension de la co-évolution des eucaryotes avec leur microflore. L'association symbiotique entre les calmars Hawaiian Bobtail,<em> Scolopes Euprymna</em> Et la bactérie bioluminescente<em> Vibrio fischeri</em> A été utilisé comme un système modèle pour comprendre les effets des bactéries bénéfiques sur le développement des animaux. Des études récentes ont montré que les macrophages, comme hémocytes, la seule composante innée cellulaire de l'hôte calmar système immunitaire, jouent probablement un rôle important dans la médiation de l'établissement et le maintien de cette association. Ce protocole va montrer comment obtenir des hémocytes de<em> E. scolopes</em> Et ensuite utiliser ces cellules dans des dosages de liaison bactérienne. Adulte calmars sont d'abord anesthésiés avant d'hémolymphe est recueillie par une seringue par le vaisseau sanguin principal céphalique. Les hémocytes hôte, contenues dans l'hémolymphe extraites, sont respectées lamelles de verre cloisonné et ensuite exposés à la protéine fluorescente verte marquée symbiotique<em> Vibrio fischeri</em> Et non-symbiotique<em> Vibrio harveyi</em>. Les hémocytes sont contre avec un colorant fluorescent (Cell Tracker Orange, Invitrogen), puis visualisé par microscopie fluorescente.
Protocol
Discussion
Les études concernant le rôle du système immunitaire dans la médiation de la signalisation moléculaire entre les bactéries bénéfiques et leurs hôtes ont, ces dernières années, apporté une contribution significative à notre compréhension de la co-évolution des eucaryotes avec leur microflore. Le système squid / vibrion a fait ses preuves en tant que système modèle souple pour répondre aux questions fondamentales dans ce domaine 2,3,5,6,8. La lumière de l'organe de scolopes calm…
Acknowledgements
Les sources de financement: Université du Connecticut Research Foundation et le Département de Biologie Moléculaire et Cellulaire à SVN, Sigma Xi Grant-in-Aid de recherche et Antonio H. et R. Majorie
Romano Graduate Education Fellowship pour AJC
Materials
| Material Name | Tipo | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| Lab-Tek chambered #1.0 borosilicate coverglass system (8-chambers) | Thermo-Fisher Scientific | 155411 | ||
| 26.5 G 1ml latex-free insulin syringe | Becton, Dickinson and Company | C34551 | ||
| Cell Tracker Orange | Invitrogen | C34551 | ||
| SteREO Discovery V20 Microscope | Zeiss | |||
| SP2 Confocal Microscope | Leica |
Riferimenti
- Koropatnick, T. A., Kimbell, J. R., McFall-Ngai, M. J. Responses of host hemocytes during the initiation of the squid-Vibrio symbiosis. Biol. Bull. 212, 29-39 (2007).
- McFall-Ngai, M. J. Unseen forces: the influence of bacteria on animal development. Dev. Biol. 242, 1-14 (2002).
- McFall-Ngai, M. J., Ruby, E. G. Symbiont recognition and subsequent morphogenesis as early events in an animal-bacterial mutualism. Science. 254, 1491-1494 (1991).
- Nyholm, S. V., Stewart, J. J., Ruby, E. G., McFall-Ngai, M. J. Recognition between symbiotic Vibrio fischeri and the haemocytes of Euprymna scolopes. Environ. Microbiol. 11, 483-493 (2009).
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- Visick, K. L., Ruby, E. G. Vibrio fischeri and its host: it takes two to tango. Curr. Opin. Microbiol. 9, 632-638 (2006).
