קבלת Hemocytes מן הוואי Bobtail קלמארי Euprymna scolopes והתבוננות דבקותם חיידקים סימביוטיים שאינן הסימביוטי
Summary
וידאו זה יהיה להדגים כיצד להשיג hemocytes (כדוריות דם) של הוואי bobtail דיונון,<em> Euprymna scolopes</em> לשימוש מבחני תא ביולוגי חיידקי הידבקות. Hemocytes יהיה מוכתם עם פלורסנט לצבוע וחשוף GFP שכותרתו חיידקים.
Abstract
מחקרים לגבי תפקידה של המערכת החיסונית בתיווך איתות מולקולרי בין חיידקים מועילים המארחים שלהם, בשנים האחרונות, תרומה משמעותית להבנת האבולוציה המשותפת של אאוקריוטים עם החיידקים שלהם. הקשר הסימביוטי בין הוואי bobtail דיונון,<em> Euprymna scolopes</em> ואת החיידק bioluminescent<em> Vibrio fischeri</em> נוצל כמערכת מודל להבנת ההשפעות של חיידקים מועילים על התפתחות של בעלי חיים. מחקרים שנעשו לאחרונה הראו כי macrophage כמו hemocytes, המרכיב הסלולר הבלעדית של מערכת החיסון המולדת המארחת של דיונון, צפוי לשחק תפקיד חשוב בתיווך הקמת ותחזוקה של עמותה זו. פרוטוקול זה יהיה להדגים כיצד להשיג hemocytes מ<em> א scolopes</em> ולאחר מכן להשתמש תאים אלה מבחני מחייב חיידקי. למבוגרים דיונון מורדמים הראשון לפני hemolymph נאסף על ידי מזרק מתוך כלי הדם הראשי cephalic. Hemocytes המארח, הכלול hemolymph המחולץ, הם דבקו coverslips החדרים זכוכית חשוף ואז חלבון הפלואורסצנט הירוק שכותרתו הסימביוטי<em> Vibrio fischeri</em> ולא סימביוטית<em> Vibrio harveyi</em>. Hemocytes הם counterstained עם פלורסנט לצבוע (Cell Tracker אורנג', Invitrogen) ולאחר מכן דמיינו באמצעות מיקרוסקופ פלואורסצנטי.
Protocol
Discussion
מחקרים לגבי תפקידה של המערכת החיסונית בתיווך איתות מולקולרי בין חיידקים מועילים המארחים שלהם, בשנים האחרונות, תרומה משמעותית להבנת האבולוציה המשותפת של אאוקריוטים עם החיידקים שלהם. מערכת דיונון / Vibrio הוכיחה את עצמה כמערכת מודל ממושמע כדי לענות על שאלות היסוד בתחום ?…
Acknowledgements
מקורות המימון: אוניברסיטת קונטיקט קרן המחקר והמחלקה לביולוגיה מולקולרית Cell ל SVN, Sigma Xi גרנט-in-Aid-מחקר אנטוניו ח ו ר Majorie
רומנו בוגר חינוך לידידות AJC
Materials
| Material Name | Tipo | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| Lab-Tek chambered #1.0 borosilicate coverglass system (8-chambers) | Thermo-Fisher Scientific | 155411 | ||
| 26.5 G 1ml latex-free insulin syringe | Becton, Dickinson and Company | C34551 | ||
| Cell Tracker Orange | Invitrogen | C34551 | ||
| SteREO Discovery V20 Microscope | Zeiss | |||
| SP2 Confocal Microscope | Leica |
Riferimenti
- Koropatnick, T. A., Kimbell, J. R., McFall-Ngai, M. J. Responses of host hemocytes during the initiation of the squid-Vibrio symbiosis. Biol. Bull. 212, 29-39 (2007).
- McFall-Ngai, M. J. Unseen forces: the influence of bacteria on animal development. Dev. Biol. 242, 1-14 (2002).
- McFall-Ngai, M. J., Ruby, E. G. Symbiont recognition and subsequent morphogenesis as early events in an animal-bacterial mutualism. Science. 254, 1491-1494 (1991).
- Nyholm, S. V., Stewart, J. J., Ruby, E. G., McFall-Ngai, M. J. Recognition between symbiotic Vibrio fischeri and the haemocytes of Euprymna scolopes. Environ. Microbiol. 11, 483-493 (2009).
- Nyholm, S. V., McFall-Ngai, M. J. The winnowing: establishing the squid-Vibrio symbiosis. Nat. Rev. Microbiol. 2, 632-642 (2004).
- Nyholm, S. V., Stabb, E. V., Ruby, E. G., McFall-Ngai, M. J. Establishment of an animal-bacterial association: recruiting symbiotic Vibrios from the environment. Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 97, 10231-10235 (2000).
- Nyholm, S. V., McFall-Ngai, M. J. Sampling the light-organ microenvironment of Euprymna scolopes: description of a population of host cells in association with the bacterial symbiont Vibrio fischeri. Biol Bull. 195, 89-97 (1998).
- Visick, K. L., Ruby, E. G. Vibrio fischeri and its host: it takes two to tango. Curr. Opin. Microbiol. 9, 632-638 (2006).
