Questo video dimostra come ottenere ematociti concentrati (cellule del sangue) dal hawaiano bobtail calamari, Euprymna scolopes Per l'utilizzo in saggi di adesione cellulare biologico e batteriche. Ematociti concentrati sarà tinto con un colorante fluorescente ed esposto a GFP-etichettata batteri.
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Articolo metodologico
Ottenere ematociti concentrati dal hawaiano Bobtail Squid Euprymna scolopes L'osservazione e la loro aderenza ai batteri simbionti e non Symbiotic
In questo articolo
Sommario
Abstract
Studi riguardanti il ruolo del sistema immunitario nella mediazione di segnale molecolare tra batteri benefici ei loro ospiti hanno, negli ultimi anni, dato un contributo significativo alla nostra comprensione della co-evoluzione degli eucarioti, con la loro flora batterica. L'associazione simbiotica tra l'hawaiano bobtail calamari,
Protocollo
- Preparare 500 ml di 0,22 micron, sterilizzata per filtrazione di acqua di mare artificiale (FSW; salinità 35 ppt). Filtro acqua di mare artificiale o naturale attraverso un micron 0,22 micron filtro per rimuovere le particelle e batteri.
- Anestetizzare un adulto hawaiano bobtail calamari (Euprymna scolopes), mettendo in una soluzione al 2% di etanolo in FSW. Posto l'animale in anestesia per circa 10 minuti. Il calamaro cesserà di nuoto e non rispondere attivamente al tatto. Respirazione continua, indicato dal movimento del mantello, e l'attività chromatophore dovrebbe essere ancora osservato.
- Luogo calamari con il lato ventrale rivolto verso l'alto su un ....
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Discussione
Studi riguardanti il ruolo del sistema immunitario nella mediazione di segnale molecolare tra batteri benefici ei loro ospiti hanno, negli ultimi anni, dato un contributo significativo alla nostra comprensione della co-evoluzione degli eucarioti, con la loro flora batterica. Il calamaro / vibrione del sistema si è dimostrato come sistema modello trattabile per rispondere alle domande fondamentali in questo campo 2,3,5,6,8. La luce-organo del Euprymna calamari scolopes permette di colonizza.......
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Ringraziamenti
Fonti di finanziamento: University of Connecticut Research Foundation e dal Dipartimento di biologia molecolare e cellulare a SVN, Sigma Xi Grant-in-Aid-di Ricerca e Antonio H. e R. Majorie
Romano Graduate Education Fellowship per AJC
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Materiali
| Nome | Azienda | Numero di catalogo | Commenti |
|---|---|---|---|
| Sistema di camere con coprivetrino in borosilicato #1.0 (8 camere) | Thermo Fisher Scientific, Inc. | 155411 | |
| Siringa da 1 ml senza lattice, calibro 26,5 G, per insulina | BD Biosciences | C34551 | |
| Cell Tracker Orange | Invitrogen | C34551 | |
| Microscopio SteREO Discovery V20 | Carl Zeiss, Inc. | ||
| Microscopio confocale SP2 | Leica Microsystems |
Riferimenti
- Koropatnick, T. A., Kimbell, J. R., McFall-Ngai, M. J. Responses of host hemocytes during the initiation of the squid-Vibrio symbiosis. Biol. Bull. 212, 29-39 (2007).
- McFall-Ngai, M. J. Unseen forces: the influence of bacteria on animal development. Dev. Biol.
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Ristampe e permessi
