Method Article

Un reversibile, metodo non invasivo per le misure di resistenza delle vie aeree e liquido di lavaggio broncoalveolare di campionamento nei topi

DOI:

10.3791/1720

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April 13th, 2010

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1Department of Medicine, Baylor College of Medicine (BCM), 2Millenium Premier Group, 3Department of Immunology, Baylor College of Medicine (BCM)

In This Article

Summary

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Ripetute misurazioni della fisiologia respiratoria e roditori di campionamento di cellule infiammatorie delle vie aeree sono auspicabili, ma generalmente non realizzabili. Qui si descrive un metodo ripetibile per l'intubazione per via orale nei topi che permette misurazioni ripetute di iperreattività delle vie aeree e il campionamento di cellule infiammatorie delle vie aeree.

Abstract

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Iperreattività delle vie aeree (AHR) misurazioni e lavaggio broncoalveolare (BAL) campionamento dei fluidi sono essenziali per modelli sperimentali di asma, ma le procedure ripetute per ottenere tali misurazioni nello stesso animale in genere non sono fattibili. In questo studio dimostriamo protocolli per ottenere da topi ripetute misurazioni di AHR e campioni di liquido di lavaggio broncoalveolare. Topi sono stati inoculati per via intranasale sette volte di più di 14 giorni con un potente allergene o sham trattati. Prima della sfida iniziale, ed entro 24 ore dopo ogni sfida intranasale, gli stessi animali sono stati anestetizzati, per via orale intubati e ventilati meccanicamente. AHR, valutata confrontando le curve dose-risposta di resistenza del sistema respiratorio (RRS) indotta da dosi crescenti per via endovenosa di acetilcolina (Ach) cloruro tra finzione e allergene-sfidato gli animali, sono stati determinati. Successivamente, e attraverso l'intubazione stesso, il polmone sinistro era lavaged in modo che conteggio differenziale delle cellule delle vie aeree potrebbe essere eseguita. Questi studi rivelano che le misurazioni ripetute di AHR e la raccolta BAL sono possibili dagli animali stessi e che l'iperresponsività delle vie aeree e la massima eosinofilia delle vie aeree sono raggiunti entro 7-10 giorni dall'inizio della sfida allergene. Questa nuova tecnica riduce significativamente il numero di topi richiesto per la sperimentazione longitudinale ed è applicabile a diverse specie di roditori, modelli di malattia delle vie aeree e strumenti di fisiologia.

Protocol

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Allergene sfida:

  1. Topi C57BL / 6, 4-8 settimane di età, sono anestetizzati in una camera di plexiglass a tenuta d'aria pulita con un 3,2% isofluorano in miscela di ossigeno al vapore per 10 minuti per raggiungere in profondità l'anestesia generale.
  2. Sfide allergene intranasale (45μL OVA (22,5 mg) e 7μL A. oryzae (7 mg), in PBS) sono amministrati, ogni Martedì, Giovedi e Domenica, per un totale di sette applicazioni consecutive.

Anestesia:

  1. Prima di ogni sfida allergene, e seguendo la sfida 7, i topi vengono somministrati un'iniezione intraperitoneale di 48 mg / kg etomidate (2 mg / ml), prima d....

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Discussion

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Lo studio di asma, e varie altre malattie ostruttive delle vie aeree, costituisce un campo attivo e in espansione della ricerca biomedica. Una componente importante di asma-correlati ricerca sperimentale è la capacità di misurare i cambiamenti nelle dimensioni delle vie aeree in condizioni variabili. Eccessivo restringimento delle vie aeree in risposta alla sfida provocatoria, una funzione canonica di asma e malattie polmonari connesse e una proprietà della iperreattività bronchiale definito delle vie aeree, è una compo.......

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Acknowledgements

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Ringraziamo il Dott. W. Mintzer per il suggerimento di eseguire l'intubazione orotracheale a fibre ottiche. Supportato da sovvenzioni U19AI070973, R01AI057696, K02HL75243 e R01HL082487 dal National Institutes of Health.

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Materials

Fisiologia delle vie aeree di misurazione del software (Rescomp) è stata preparata su ordinazione (Millennium Premier Gruppo; 415-519-4371).
I dati sono stati analizzati utilizzando un PC con Windows XP dotato di un Pentium III CPU (Intel, Inc. Santa Clara, CA) e un 17-pin convertitore di segnale da analogico a digitale (National Instruments, # PC-LPM16).
Una piccola stazione di lavoro delle vie aeree fisiologia animale è stato assemblato su ordinazione (Millennium Premier Group) con trasduttori di pressione disponibili in commercio (parte # TRD5700 e TRD4510), moduli di preamplificatore (parte # MAX2270), telaio (parte # MAX1320, tutti da Buxco, Inc. Wilmington, NC ) e di un pletismografo personalizzato piccolo animale.
0,5 millimetri di diametro esterno in fibra ottica filo, collegato alla sorgente luminosa (Cole Illuminatore Palmer, serie 41722)
Ventilatore (Harvard Apparatus mouse Ventilatore, # 687)
10 mm, ago 27ga (BD Biosciences, cat. No. 309602)
Calore lampada
1 ml siringa (BD Biosciences, cat. No. 305109)
4 morsetti (Pony 3200 morsetto a molla)
0.5 mm esterno per la guida intubazione
Emocitometro
Superfrost / più microscopio diapositive (cat Fisher. No. 12-550-15)
Shandon Filtro Cards (Thermo cat. No. 5991022)
Cellula scivolo differenziale macchia (cat Fisher. No. 122911)
Microscopio ottico (Leica)
Cytospin 3 (Shandon)
20 ga, 1,25 pollici ProtectIV cateteri per via endovenosa (Smith Medical)
0,5 mm ottico in fibra di polimero (Edmund Optics # NT02-532).

References

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Hamelmann, E. Noninvasive measurement of airway responsiveness in allergic mice using barometric plethysmography. Am. J. Respir. Crit. Care Med. 156, 766-775 (1997).
  2. Adler, A., Cieslewicz, G., Irvin, C. G.

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Airway Resistance MeasurementsBronchoalveolar LavageOral Intubation MiceMechanical VentilationAcetylcholine ChallengeRespiratory System ResistanceTail Vein InjectionFiber Optic ThreadTracheal CannulaBAL Fluid Collection

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