זה פרוטוקול וידאו ממחיש את הטכניקה סקווש המשמשים את המעבדה יוהנסן להכין<em> תסיסנית</em> הכרומוזומים polytene תיוג נוגדן.
Abstract
תסיסנית כבר זמן רב במערכת מודל האהוב לחקר הקשר בין מבנה הכרומטין ויסות הגנים, בשל היתרונות ציטולוגית הניתנים על ידי ענקי הרוק polytene הכרומוזומים של בלוטת הזחלים instar השלישי. ברקמת זה הכרומוזומים לעבור סיבובים רבים של שכפול בהעדר חלוקת התא והוליד כ 1,000 עותקים. ה-DNA נשאר מיושר לאחר כל מחזור replicative וכתוצאה מכך הכרומוזומים מוגדלים מאוד אשר מספקים הזדמנות ייחודית, כדי לקשר בין המורפולוגיה הכרומטין עם לוקליזציה של חלבונים ספציפיים. כתוצאה מכך, חלה על רמה גבוהה של עניין בהגדרת שינויים epigenetic נוכח גנים שונים בשלבים שונים של תהליך השעתוק. כלי חשוב עבור מחקרים כאלה הוא תיוג של כרומוזומים polytene עם נוגדנים האנזים, גורם שעתוק, או שינוי היסטון של עניין. זה פרוטוקול וידאו ממחיש את הטכניקה סקווש המשמשים את המעבדה יוהנסן להכין תסיסנית הכרומוזומים polytene תיוג נוגדן.
Protocol
פרוטוקול הבאים להכנת כרומוזום polytene סקווש מותאמת ההליך המתואר יוהנסן et al. (2009). 1. תרבות של הזחלים third תסיסנית instar על מנת לקבל את הכרומוזומים polytene האופטימלי עבור ההכנות סקווש באיכות גבו?…
Discussion
הכללתו של חומצות אצטית לקטית פרוטוקולים קיבעון קונבנציונאלי סקווש מקלה הן ברזולוציה interband והזרוע כרומוזומליות מתפשטת אך למרבה הצער epitopes כמה אינם שורדים את הטיפול הזה. דוגמה epitope כזה היא H3S10ph (Cai et al. 2008). מאז הטיפול בחומצה יש גם חיסרון, כי זה מרווה את הקרינה הפנימית…
Acknowledgements
אנו מודים לגב 'ו' Lephart לאחזקת מלאי לעוף עבודה זו נתמכה על ידי המכונים הלאומיים לבריאות מענק (GM62916) ואת הקרן הלאומית למדע מענק (MCB0817107).
Cai, W., Jin, Y., Girton, J., Johansen, J., Johansen, K. M. Preparation of Drosophila Polytene Chromosome Squashes for Antibody Labeling. J. Vis. Exp. (36), e1748, doi:10.3791/1748 (2010).