Подготовка политенных хромосом Drosophila Кабачки для антител маркировки
Summary
Это видео показывает протокол сквош техника, используемая в Йохансен лаборатории для подготовки<em> Drosophila</em> Политенных хромосом антитела маркировки.
Abstract
Дрозофилы уже давно любимые модельной системой для изучения взаимосвязи между структурой хроматина и регуляции генов в связи с цитологическим преимущества, которые дает гигантский слюнной железы политенных хромосом личинок третьего возраста. В этой ткани хромосом пройти много раундов репликации в отсутствие деления клеток что приводит к приблизительно 1000 экземпляров. ДНК остается выровнен после каждого цикла репликации в результате чего значительно увеличен хромосом, которые предоставляют уникальную возможность соотнести хроматина морфологии с локализацией специфических белков. Следовательно, наблюдается высокий уровень заинтересованности в определении эпигенетические модификации присутствует на различных генов и на разных этапах процесса транскрипции. Важным инструментом для таких исследований является маркировка политенных хромосом с антителами к фермента, фактора транскрипции, или модификации гистонов интересов. Это видео показывает протокол сквош техника, используемая в Йохансен лаборатории для подготовки политенных хромосом дрозофилы на антитела маркировки.
Protocol
Discussion
Включение уксусная и молочная кислоты в обычных протоколов фиксации сквош облегчает как разрешение межзонных и хромосомные руку распространения, но к сожалению, некоторые эпитопы не выживают этого лечения. Примером такого эпитопа является H3S10ph (Cai и соавт., 2008). После кислотной обр…
Acknowledgements
Мы благодарим г-жа В. Lephart для поддержания запасов летать Работа выполнена при поддержке Национального института здравоохранения гранта (GM62916) и Национального научного фонда грант (MCB0817107).
Riferimenti
- Cai, W., Bao, X., Deng, H., Jin, Y., Girton, J., Johansen, J., Johansen, K. M. RNA polymerase II-mediated transcription at active loci does not require histone H3S10 phosphorylation in Drosophila. Development. 135, 2917-2925 (2008).
- DiMario, P., Rosby, R., Cui, Z. Direct visualization of GFP-fusion proteins on polytene chromosomes. Dros. Inf. Serv. 89, 115-118 (2006).
- Johansen, K. M., Cai, W., Deng, H., Bao, X., Zhang, W., Girton, J., Johansen, J. Methods for studying transcription and epigenetic chromatin modification in Drosophila polytene chromosome squash preparations using antibodies. Methods. 48, 387-397 (2009).
