Isolatie van de Mens navelstreng endotheel cellen (HUVEC)
Summary
Deze video protocol illustreert de isolatie en de cultuur van humane navelstreng endotheel cellen (HUVEC) van menselijke navelstreng. Eenmaal geïsoleerd deze cellen kunnen worden gebruikt voor in-vitro angiogenese assays, zoals de Optimized fibrinegel Bead Assay ook aangetoond door de Hughes lab.
Abstract
Angiogenese is een complexe multi-step proces, waar in reactie op de angiogene stimuli, nieuwe schepen worden gemaakt van de bestaande bloedvaten. Deze stappen zijn: afbraak van de basale membraan, proliferatie en migratie (ontspruiten) van endotheelcellen (EC) in de extracellulaire matrix, de uitlijning van de EC in de koorden, lumen vorming, anastomose, en de vorming van een nieuwe kelder membraan. Velen in vitro testen zijn ontwikkeld om dit proces te bestuderen, maar de meeste alleen maar na te bootsen bepaalde stadia van de angiogenese, en morfologisch de schepen vaak niet lijken op schepen in vivo. Hier laten we zien een geoptimaliseerd in vitro angiogenese-test dat de menselijke navelstreng EG en fibroblasten gebruikt. Dit model recapituleert alle van de belangrijkste vroege stadia van angiogenese, en vooral de schepen weer te geven patent intercellulaire lumen, omringd door gepolariseerd EC. Schepen kunnen gemakkelijk worden waargenomen door de fase-contrast-en time-lapse microscopie, en teruggewonnen in zuivere vorm voor downstream-toepassingen.
Protocol
Materials
| Material Name | Tipo | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| 0.1% Collagenase | 10ml per cord, warmed to 37°C | |||
| Tissue culture flasks | T75, one per cord. | |||
| Hanks medium | ||||
| scissors | sterile | |||
| beaker | sterile | |||
| 50 ml tubes |
