El aislamiento de las células endoteliales de vena umbilical (HUVEC)
Summary
Este protocolo de vídeo ilustra el aislamiento y cultivo de las células endoteliales de vena umbilical (HUVEC) de cordón umbilical humano. Una vez aisladas estas células se pueden utilizar en los ensayos de la angiogénesis in vitro, como el gel de fibrina Optimizado ensayo de bolas también se demuestra por el laboratorio de Hughes.
Abstract
La angiogénesis es un complejo proceso de múltiples pasos, donde en respuesta a estímulos angiogénicos, nuevos vasos son creados a partir de los vasos existentes. Estas medidas incluyen: la degradación de la membrana basal, proliferación y migración (brotes) de las células endoteliales (CE) en la matriz extracelular, la alineación de la CE en los cables, la formación del lumen, anastomosis y la formación de una nueva membrana basal. Muchos de los ensayos in vitro se han desarrollado para estudiar este proceso, pero la mayoría sólo imitar ciertas etapas de la angiogénesis, y morfológicamente los vasos a menudo no se parecen a los barcos en vivo. Aquí se demuestra una optimización en el ensayo de angiogénesis in vitro que utiliza la vena umbilical humana CE y los fibroblastos. Este modelo recapitula todas las etapas clave al comienzo de la angiogénesis, y sobre los vasos pantalla lúmenes patente intercelular rodeado de polarización CE. Los buques pueden ser fácilmente observados por contraste de fases y microscopía lapso de tiempo, y se recuperó en forma pura para aplicaciones posteriores.
Protocol
Materials
| Material Name | Tipo | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| 0.1% Collagenase | 10ml per cord, warmed to 37°C | |||
| Tissue culture flasks | T75, one per cord. | |||
| Hanks medium | ||||
| scissors | sterile | |||
| beaker | sterile | |||
| 50 ml tubes |
