Isolering av mänskliga Endothelial Umbilical Vein Cells (HUVEC)

Summary

Denna video protokoll illustrerar isolering och odling av mänskliga endotelceller navelsträng ven celler (HUVEC) från människa navelsträngen. När isolerade dessa celler kan användas för in vitro-angiogenes-analyser som Optimerad Fibrin Gel Bead-analys också bevisas av Hughes labbet.

Abstract

Angiogenes är en komplicerad process i flera steg, där som svar på angiogena stimuli, nya fartyg skapas från den befintliga kärlbädden. Dessa åtgärder inkluderar: nedbrytning av basalmembranet, spridning och migration (spirande) av endotelceller (EG) i den extracellulära matrisen, anpassning av EG i sladdar, lumen bildning, anastomos och bildandet av en ny basalmembranet. Många in vitro-tester har utvecklats för att studera denna process, men de flesta bara härma vissa skeden av angiogenes, och morfologiskt fartygen ofta inte liknar fartygen in vivo. Här visar vi ett optimerat in vitro-angiogenes test som använder mänskliga EG navelsträngen ven och fibroblaster. Denna modell rekapitulerar alla de viktigaste tidiga stadierna av angiogenes, och viktigast fartygen displayen patentet intercellulära lumen omgiven av polariserad EG. Fartyg kan lätt observeras av faskontrast och Time-lapse mikroskopi och som återvinns i ren form för tillämpningar i efterföljande led.

Protocol

Förfarande Lägg sladden på rena pad och badda bort överflödigt blod. Gör färska snitt i båda ändarna av sladden. Sätt in 21 1 / 2 G nål med plast nålskyddet på, in i venen. (Den ven är den största öppningen, med de 2 mindre är artärer) Spänn nålen på plats med en hemostat och fäst 20CC spruta av Hanks till nålen. Tryck Hanks genom venen med måttligt tryck. Samla avfallet i bägaren med blekmedel. (Håll nå…

Materials

Material Name	Tipo	Company	Catalogue Number	Comment
0.1% Collagenase				10ml per cord, warmed to 37°C
Tissue culture flasks				T75, one per cord.
Hanks medium
scissors				sterile
beaker				sterile
50 ml tubes