Mama magnetosome aktivasyonu dahil olmak gösterildi eşsiz bir Magnetosome ilişkili protein. Burada Mama silme mutant arıtma protokolü (MamAΔ41) mevcut<em> M. magneticum</em> AMB-1.
Magnetotactic bakteri jeomanyetik alanlar boyunca kendi yolunuzu mümkün Sudaki mikroorganizmaların çeşitli bir grup oluşturmaktadır. Bu davranış uygun ortamlar için arama yardımcı olduğuna inanılıyor<em> (1)</em>. Bu yetenek magnetosome öngördüğü, lipid lineer bir zincir montaj oluşan bir hücre içi organel manyetit veya greigite ~ 50-nm kristal biomineralize ve içine her mümkün vezikül. Fonksiyonel veziküllerin oluşumu için gerekli olduğu gösterilmiştir magnetosome bir ilke bileşeni Mama. Mama en karakterize magnetosome ilişkili proteinlerin biridir oldukça bol magnetosome ilişkili protein<em> In vivo</em><em> (2-6)</em>. Bu makale, Mama arıtma odaklanır çalışılan rağmen<em> In vivo</em> Net fonksiyonel veya yapısal ayrıntılar için tespit edilmiştir. Biyoinformatik analizi Mama, protein içeren bir tetra-tricopeptide tekrar (TPR) olduğunu ileri sürdü. TPR proteinlerin geniş bir yelpazede büyük bir kat ya da yapıcı bir parçası olarak bulunan bir yapısal motif, protein-protein etkileşimleri ve aracılık çok protein kompleksleri için bir şablon olarak hizmet vermektedir<em> (7)</em>. TPRs ökaryotik hücre organel süreçleri ve birçok bakteriyel yollar çok önemli görevlerde yer<em> (8-14).</emMama anlamak> için, protein içeren eşsiz bir TPR, bir ilk adım olarak yüksek derecede saflaştırılmış protein gereklidir. Bu makalede, istikrarlı bir Mama silme mutant (MamAΔ41) arıtma protokolü mevcut<em> M. magneticum</em> AMB-1.
Proteinlerin saflaştırılması, herhangi bir biyokimyasal proteinler ya da yapısal çalışmalar içinde önemli bir adımdır. Her protein kendi davranışları ile benzersiz olduğu için, onun özelliklerini tanımlamak ve buna göre arıtma değiştirmek gerekiyor. Protein hedef biyoinformatik araçlar kullanarak arıtma doğru bir ilk adım olarak analiz edilmelidir. Onlar, hedef iso-elektrik nokta hesaplamak için çevre ve özel iyonları / ligandlar için ihtiyacı azaltıcı / oksitleyici ihtiyacı değerlen…
Biz, onların tavsiyelerini ve yorumlar için verdiği destek ve Geula Davidov, Noam Grimberg ve Chen Guttman Dr. Amir Aharoni kabul etmiş sayılırsınız.
Material Name | Tipo | Company | Catalogue Number | Comment |
---|---|---|---|---|
French Press | Equipment | Thermo scientific | FA-078A | |
Pressure cell | Equipment | Thermo scientific | FA-032 | |
Ultra-centrifuge | Equipment | Sorvall | Discovery 90SE | |
Rottor | Equipment | Beckman | Ti60 | |
Ultra-centrifuge tubes; PC-Bottle+Cap Assay 26.3ml | Equipment | Beckman | BC-355618 | |
2.5cm diameter, Glass Econo-Column Chromatography Columns | Equipment | BioRad | 737-2521 | |
Ni-NTA His Bind resin | Equipment | Novagen | M0063428 | |
Spectrophotometer | Equipment | Amersham Biosiences | Ultraspec 2100 pro | |
Quartz cuvette | Equipment | Hellma | 104-QS | |
Fast Performance Liquid Chromatography- AKTA purifier 10 | Equipment | GE Healthcare Biosciences | 28-4062-64 | |
Ion exchange column – MonoQ 4.6/100 PE | Equipment | GE Healthcare Biosciences | 10025543 | |
Size exclusion pre-packed column-HiLoad 26/60 Superdex 200 | Equipment | GE Healthcare Biosciences | 17-1071-01 | |
Centricon – Vivaspin15 – 10,000 MWCO | Equipment | Sartorius Stedim Biotech GmbH | VS1501 | |
Table centrifuge | Equipment | Thermo scientific | IEC CL30R | |
MALDI-TOF | Equipment | Bruker Daltonics | Reflex IV | |
Tris-HCl (hydrotymethyl) aminomethane | Reagent | BioLab | 20092391 | |
Sodium Chloride | Reagent | FRUTROM | 235553470 | |
Imidazole | Reagent | Alfa Aesar | 288-32-4 | |
EDTA free protease inhibitors cocktail | Reagent | Sigma | P-8849 | |
Dnase I (Deoxyribonuclease I) | Reagent | Sigma | DN-25 | |
Bovine Thrombin | Reagent | Fisher BioReagents | BP25432 | |
Glycine | Reagent | BioLab | 07132391 | |
Soudim Dodecyl Sulfate (SDS) | Reagent | BioLab | 19822391 | |
Beta-mercaptoethanol | Reagent | Sigma | M-3148 | |
InstantBlue | Reagent | Expedeon | 1SB01L | |
PageRuler Prestained Protein Ladder | Reagent | Fermentas | SM0671 |