Anjiyogenez Çalışmaları için optimize edilmiş Fibrin Jel Boncuk Testi
Summary
Bu video in vitro anjiyogenez tayininde bir protokol anjiyogenez özetlediği çeşitli aşamaları olduğunu göstermektedir. Zaman atlamalı çimlenme görüntüleri, lümen oluşumu, dallanma ve anastomoz – anjiyogenez temel özellikleri gösterilmektedir.
Abstract
Anjiyogenez anjiyogenik uyaranlara yanıt olarak, yeni damarlar mevcut damarsal oluşturulan karmaşık çoklu adımlı bir süreçtir. Bu adımlar şunlardır: ekstrasellüler matriks, kablosuna AT uyum içine endotel hücreleri bazal membran, proliferasyon ve göç (çimlenme) (EC) bozulması, dallanma, lümen oluşumu, anastomoz, ve yeni bir bazal membran oluşumu. In vitro tayinlerde, bu süreç pek çok çalışma için geliştirilmiş, ancak çoğu sadece belirli aşamalarında anjiyogenez taklit ve morfolojik testlerin içinde gemilerin çoğu in vivo gemileri benzemez edilmiştir. Nehls ve Drenckhahn tarafından daha önceki çalışmaları üzerine dayanarak, insan umbilikal ven EC ve fibroblastlar kullanır in vitro anjiyogenez tayininde bir iyimserlik var. Bu model özetlediği anjiyogenez en önemli erken aşamalarında ve daha da önemlisi, gemilerin polarize Avrupa Komisyonu tarafından çevrili patent hücrelerarası lümen gösterilecek. EC cytodex microcarriers üzerine kaplanmış ve fibrin jel içine gömülü. Fibroblastlar EC boncuk yüzeyinden çimlenme teşvik gerekli çözünür faktörlerin sağlayan jel üstünde katmanlı. Birkaç gün sonra, çok sayıda gemiler, faz-kontrast ve zaman atlamalı mikroskobu altında kolayca gözlenebilir olduğunu mevcut. Bu video bu kültürlerin kurulmasında önemli adımlar gösteriyor.
Protocol
Discussion
, In vitro anjiyogenez deneylerde üç boyutlu (3D) 2D kültürleri kullanılarak elde edilebilir in vivo daha gerçek bir ortamda daha yakın bir model sunuyoruz artan bir fikir birliği yoktur. Bu üstün 3D sistemleri tekrarlanabilir ve anjiyogenez önemli adımlar birkaç taklit etmek mümkün gerektiği açıktır. Önceki birkaç 3D testleri geliştirilmiş olsa da, bunların pek çoğu ya mikrovasküler hücreleri elde etmek için zor kullanmak, ya da sadece bazı aşamaları özetlemek. Bu video, açıklamak ve vasküler araştırma…
Materials
| Material Name | Tipo | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| Cytodex-3 Beads | Reagent | Amersham Pharmacia | 17-0485-01 | 10 g/bottle. 1. 0.5 g of dry beads are hydrated and swollen in 50 mL PBS (pH=7.4) for at least 3 hours at RT. Use a 50 mL tube and place it on the rocker. 2. Let the beads settle down (~ 15 min). Discard the supernatant and wash the beads for a few minutes in fresh PBS (50 mL). 3. Discard the PBS and replace with fresh PBS: 25 mL -> 20 mg/mL => 60000 beads/mL or 50 mL -> 10 mg/mL => 30000 beads/ mL 4. Place the bead suspension in a siliconized glass bottle (Windshield Wiper or Sigmacote). 5. Sterilize the beads by autoclaving for 15 min at 115C. 6. Store it at 4C. |
| Aprotinin | Reagent | Sigma | A-1153 | 10mg/bottle. Reconstitute lyophilized aprotinin at 4 U/mL in DI water. Sterile filter. Make aliquots of 1 mL each. Store at -20C. |
| Fibrinogen Type I | Reagent | Sigma | F-8630 | 1g. Dissolve 2 mg/mL fibrinogen in DPBS Note clottable protein % and adjust accordingly Heat in a 37C-water bath to dissolve the fibrinogen. Mix by inverting the tube. Do not vortex. Sterile filter through 0.22 um |
| Thrombin | Reagent | Sigma | T-3399 | 22 mg=1000 units. Reconstitute in sterile water at 50 U/mL. Make aliquots of 0.5 mL each. Store at -20C. |
Riferimenti
- Nehls, V., Drenckhahn, D. A microcarrier-based cocultivation system for the investigation of factors and cells involved in angiogenesis in three-dimensional fibrin matrices in vitro. Histochem Cell Biol. 104, 459-466 (1995).
- Nehls, V., Drenckhahn, D. A novel, microcarrier-based in vitro assay for rapid and reliable quantification of three-dimensional cell migration and angiogenesis. Microvasc Res. 50, 311-322 (1995).
