β - 아밀로이드 Oligomeric의 준비 1-42와 유도
Summary
알츠하이머병 중 하나는 기능은 Aβ의 상승입니다<sub> 1-42</sub> 펩타이드. 여기 합성 Aβ를 준비를위한 프로토콜을 제공합니다<sub> 1-42</subhippocampal 장기 Potentiation을 impairs> oligomers는, 세포의 메모리 상관 관계. 이 절차는 Aβ 유발 병리학 및 약물 검사의 메커니즘을 조사하는 데 유용합니다.
Abstract
시냅스 연결의 장애가 알츠하이머 병 (AD)의 초기 단계에서 발생하는 미묘한 amnesic 변경 사항을 기초로 가능성이 높습니다. β – 아밀로이드 (Aβ), AD 높은 금액에서 생산되는 펩티드는 세포가 학습과 기억의 상관 관계를 장기 Potentiation (LTP)을 감소시키는 것으로 알려져 있습니다. 사실, Aβ에 의한 LTP 장애는 AD 모델과 같은 신경 손상을 완화하거나 되돌리는 능력 심사 약물에 대한 신경 장애를 공부에 유용한 실험 패러다임이다. 연구 Aβ는 oligomeric 양식을 통해 우선적으로 LTP 장애를 생산하는 것으로 나타났습니다. 여기 oligomerized 합성의 재관류에 의해 급성 hippocampal 조각에 Aβ1 – 42 펩타이드를 혼란 LTP에 대한 자세한 프로토콜을 제공합니다. 이 비디오에서는, 우리는 oligomeric Aβ의 준비를위한 단계별 절차를 설명합니다<sub> 1-42</sub>. 그렇다면, 우리는 LTP가 oligomerized Aβ에 노출 hippocampal 조각 축소되는 개별 실험을 수행<sub> 1-42</sub> 노 Aβ 제어 실험에서 조각에 비해<sub> 1-42</sub> 노출이 발생했다.
Protocol
Discussion
위에서 설명한 바와 같이, oligomeric Aβ의 준비에 몇 가지 문제가 손상되지 않은 LTP가 발생할 수 있습니다. Aβ 열화 또는 Aβ oligomerization의 부족이 발생했을 수 있는지 여부를 평가하는 한 가지 방법은 트리스 – Tricine 페이지 웨스턴 / 모래 바닥 분석 및 분석 ultracentrifugation (이 프로토콜에서 설명하지 않은)를 사용하여 Aβ 준비를 평가하는 것입니다. 서양 모래 바닥 샘플 non-denaturing/non-reducing 조건 하?…
Divulgazioni
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
이 작품은 신경 장애 및 뇌졸중 NIH 국립 연구소 (NINDS) (NS049442)에 의해 지원되었다.>
Materials
| Material Name | Tipo | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| Aβ 1-42 (lyophilized) | American Peptide Co. | 62-0-80 | ||
| 1,1,1,3,3,3-Hexafluoro-2-Propanol (HFIP) | Fluka | 52517 | ||
| Dimethylsulfoxide (DMSO) | Biotium | 90082 | ||
| 50mL Polypropylene Centrifuge Tubes | Corning | 05-538-67 | ||
| 1.5ml MaxyClear microtubes Maximum recovery | Axygen | MCT-150-L-C | ||
| Phosphate-Buffered Saline pH 7.4 | Invitrogen-Gibco | 10010-023 | ||
| GASTIGHT Syringes 250 μL | Hamilton | 1725 | ||
| Bath sonicator | Branson | 3510 | ||
| Savant SpeedVac Concentrator System | Various distributors | SC 110A |
Riferimenti
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