Una de las características de la enfermedad de Alzheimer es la elevación de Aß<sub> 1-42</sub> Péptido. Aquí les ofrecemos un protocolo para la preparación de Aß sintético<sub> 1-42</sub> Oligómeros, lo cual afecta el hipocampo potenciación a largo plazo, un celular correlato de la memoria. Este procedimiento es útil para la investigación de los mecanismos de Aß inducida por detección de patología y de drogas.
Deterioro de las conexiones sinápticas es probable que subyacen a los cambios sutiles que ocurren amnésico en las primeras etapas de la enfermedad de Alzheimer s (AD). β-amiloide (Aß), un péptido producido en grandes cantidades en el año, se sabe que reduce potenciación a largo plazo (LTP), un celular correlato de aprendizaje y la memoria. De hecho, el deterioro causado por Aß LTP es un paradigma útil experimental para el estudio de las disfunciones sináptica en modelos de AD y de detección de drogas capaces de mitigar o revertir tales alteraciones sinápticas. Los estudios han demostrado que Aß produce la interrupción de LTP preferentemente a través de su forma oligomérica. Aquí les ofrecemos un protocolo detallado para la LTP impedir en la perfusión de oligomerized sintéticos Aβ1-42 péptido en agudas rodajas de hipocampo. En este video, se describe un procedimiento paso a paso para la preparación de Aß oligoméricos<sub> 1-42</sub>. Luego, seguimos un experimento individual en la que la LTP se reduce en rodajas de hipocampo expuestas a Aß oligomerized<sub> 1-42</sub> En comparación con las rebanadas en un experimento de control cuando no se Aß<sub> 1-42</subExposición> había ocurrido.
Como se describió anteriormente, existen varios problemas en la preparación de Aß oligoméricas pueden dar lugar a LTP intacta. Una forma de evaluar si la degradación de Aß o la falta de oligomerización Aß pudo haber ocurrido es evaluar la preparación de Aß con TRIS-Tricina PÁGINA / análisis de Western Blot y ultracentrifugación analítica (no se describe en este protocolo). Cuando Western Blotting muestras se preparan en condiciones non-denaturing/non-reducing, una preparación exitosa debe generar una firm…
The authors have nothing to disclose.
Este trabajo fue apoyado por el NIH Instituto Nacional de Trastornos Neurológicos y Accidentes Cerebrovasculares (NINDS) (NS049442).>
Material Name | Tipo | Company | Catalogue Number | Comment |
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Aβ 1-42 (lyophilized) | American Peptide Co. | 62-0-80 | ||
1,1,1,3,3,3-Hexafluoro-2-Propanol (HFIP) | Fluka | 52517 | ||
Dimethylsulfoxide (DMSO) | Biotium | 90082 | ||
50mL Polypropylene Centrifuge Tubes | Corning | 05-538-67 | ||
1.5ml MaxyClear microtubes Maximum recovery | Axygen | MCT-150-L-C | ||
Phosphate-Buffered Saline pH 7.4 | Invitrogen-Gibco | 10010-023 | ||
GASTIGHT Syringes 250 μL | Hamilton | 1725 | ||
Bath sonicator | Branson | 3510 | ||
Savant SpeedVac Concentrator System | Various distributors | SC 110A |