Een kenmerk van de ziekte van Alzheimer is de hoogte van Aß<sub> 1-42</sub> Peptide. Hier hebben we een protocol voor het bereiden van synthetische Aß<sub> 1-42</sub> Oligomeren, die hippocampus Long-Term Potentiëring ernstig schaadt, een cellulair correlaat van het geheugen. Deze procedure is handig voor het onderzoeken van de mechanismen van Aß-geïnduceerde pathologie en drug discovery.
Bijzondere waardevermindering van synaptische verbindingen is waarschijnlijk de subtiele amnesic veranderingen die zich op de vroege stadia van de ziekte van Alzheimer s (AD) ten grondslag liggen. β-amyloïde (Aß), een peptide geproduceerd in grote hoeveelheden in AD, is bekend dat het Long-Term Potentiëring (LTP), een cellulaire correlaat van leren en geheugen te verminderen. Inderdaad, LTP bijzondere waardevermindering wordt veroorzaakt door Aß is een nuttig experimenteel paradigma voor het bestuderen van synaptische disfuncties in AD modellen en voor het screenen van geneesmiddelen die in staat van verzachtende of terugkeer dergelijke synaptische bijzondere waardeverminderingen. Studies hebben aangetoond dat Aß de LTP verstoring bij voorkeur produceert via zijn oligomere vorm. Hier hebben we een gedetailleerd protocol voor afbreuk te doen aan LTP door perfusie van oligomerized synthetische Aβ1-42 peptide op acute hippocampus plakjes. In deze video, schetsen we een stap-voor-stap procedure voor de voorbereiding van oligomere Aß<sub> 1-42</sub>. Dan volgen we een individuele experiment waarin LTP is verlaagd in de hippocampus plakken blootgesteld aan oligomerized Aß<sub> 1-42</sub> Vergeleken met plakjes in een controle-experiment waar geen Aß<sub> 1-42</sub> Blootstelling had plaatsgevonden.
Zoals hierboven beschreven, kunnen verschillende problemen bij de voorbereiding van oligomere Aß resulteren in onverkort van LTP. Een manier om te beoordelen of Aß degradatie of het ontbreken van Aß oligomerization kan hebben plaatsgevonden is het evalueren van de Aß voorbereiding met behulp van TRIS-Tricine PAGE / Western blotting analyse en analytische ultracentrifuge (niet beschreven in dit protocol). Wanneer Westerse Blotting monsters worden bereid onder non-denaturing/non-reducing voorwaarden kan het een succes…
The authors have nothing to disclose.
Dit werk werd ondersteund door NIH Nationaal Instituut voor Neurologische Aandoeningen en Stroke (NINDS) (NS049442).>
Material Name | Tipo | Company | Catalogue Number | Comment |
---|---|---|---|---|
Aβ 1-42 (lyophilized) | American Peptide Co. | 62-0-80 | ||
1,1,1,3,3,3-Hexafluoro-2-Propanol (HFIP) | Fluka | 52517 | ||
Dimethylsulfoxide (DMSO) | Biotium | 90082 | ||
50mL Polypropylene Centrifuge Tubes | Corning | 05-538-67 | ||
1.5ml MaxyClear microtubes Maximum recovery | Axygen | MCT-150-L-C | ||
Phosphate-Buffered Saline pH 7.4 | Invitrogen-Gibco | 10010-023 | ||
GASTIGHT Syringes 250 μL | Hamilton | 1725 | ||
Bath sonicator | Branson | 3510 | ||
Savant SpeedVac Concentrator System | Various distributors | SC 110A |